CLEC 是C type lectin（C型凝集素）家族基因
CLEC4M基因是19号染色体上C型凝集素家族中的一 员，它被证明是多种传染性疾病病毒的受体，如HIV-1, SARS-Cov, HCV等。该基因的第4外显子的VNTR (Variable Number of Tandem Repeats，VNTR )在全球人类群体中存
2×PCR mix ddH2O 引物1，引物2
2×PCR mix 引物1，引物2 DNA样品 ddH2O
10μl 各0.4μl
3μl
在PCR管盖上标记号码，便于辨认
放入PCR仪，并设置程序
变性 30循环
延伸
95℃ 5min 95℃ 20s 59℃ 30s 72℃ 45s 72℃ 5min
CLEC 4M基因序列
实验原理
• 原理：用裂解液和蛋白酶K裂解口腔黏膜细胞，释放DNA， 用浓盐法沉淀蛋白质，离心去除蛋白质，再用异丙醇沉淀 DNA。
• 裂解液配方： • 10mM Tris-HCl，10mM KCl, 10mM MgCl2, 2mM EDTA,
0.4M NaCl, 1%SDS.
分子生物学实验优秀课件
基因多态性
多态性是指在一个生物群体中，同时和经常存 在两种或多种不连续的变异型或基因型(genotype) 或等位基因(allele)，亦称遗传多态性(genetic polymorphism)或基因多态性。
DNA片段长度多态性 基因多态性 DNA重复序列多态性
单核苷酸多态性
CLEC4M 与SARS
体内存在一种SARS冠状病毒的受体L-SIGN，由CLEC4M基因所编码。 该基因第4外显子存在3-9个69bp的重复片段，人群中超过50%的人以7个 重复为主，常见的基因型为7/7，5/5，7/5 等不同的纯合或杂合状态， 这个重复区编码位于胞外受体的颈部。研究表明，纯合型如7/7或 5/5的 个体较杂合型7/5的个体较少感染SARS病毒。
PCR过程大概100分钟
PCR仪器界面和参数
紫外透射分析
点样
将PCR扩增产物加入琼脂糖凝胶孔内，点样量10μl
DNA片段长度多态性(FLP)：
即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性 内切酶位点的变化，而导致DNA片段长度的变化，又称限 制性片段长度多态性。
DNA重复序列的多态性(RSP) ：
主要表现于重复序列拷贝数的变异 ，如小卫星DNA 和微卫星DNA。
单核苷酸多态性(SNP) ：
即散在的单个碱基的不同，基因组中单核苷酸的缺 失,插入与重复序列不属於SNP，但更多的是单个碱基的置 换。