1953，Parker 和Horst 描述一种全血细胞计 数器装置，成为流式细胞仪的雏形
10-20 color cytometer
流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理，光电测 量，计算机，细胞荧光化学，单克隆抗体技术为一体 的高科技细胞分析仪。
流式细胞术(Flow Cytometry):利用流式细胞仪对处于快 速流动的单个细胞/生物颗粒进行多参数、快速（每秒 可达1000-10000个）的定量分析和分选（纯度可达 99%以上）的技术。
感染性疾病
CD64检测
移植免疫 肿瘤 细胞因子检测
免疫状态监测
淋巴细胞亚群 活化的T淋巴细胞 抗原特异性免疫细胞 调控性T细胞 树突状细胞 先天免疫细胞
淋巴细胞亚群分析
根据功能，淋巴细胞主要分为 B淋巴细胞（CD19+），与体液免疫有关 T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关 总T和总B可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NK细胞（CD3-CD16+56+），行使免疫监控功能， 能够介 导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。
104
103
R7
CD4 PE
102
101
100
100
101ห้องสมุดไป่ตู้
102
103
104
C D 3 F IT C
流式细胞仪的临床应用
免疫状态监测
淋巴细胞亚群/树突状细胞及其他免疫细胞检测
血液病
白血病及淋巴瘤免疫分型及微小残留（MRD）检测 血小板检测及网织红细胞和网织血小板计数/PNH检测
自身免疫病
HLA-B27检测
流式细胞仪的工作原理
液流系统 流动室 液流驱动系统
光学系统 激光光源 光收集系统
电子系统 光电转换 数据处理系统
细胞分选系统
液流系统：流动室、液流驱动系统
进样孔
荧光信号
鞘液
激光束
流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等 透明、稳定的材料制作，是液流系统的心脏。
样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；
PosPitoisviteiv e CeClel ll
AbsoAblus otleute CoCuonutnt BeBaedadss
NegNaetigvaetiv e CeClelll
CD4C DPXEPE
Absolute Counts -- Cells per mL
Absolute Counts — Cells per µL
1930年，Caspersson 和Thorell开始致力于细胞的计数
1969 ， Van Dilla Fulwyler 发明第一台荧光检测细胞计
1975 ， Kohler 和Milstein 提出单克隆抗体技术
sorter – high-end res
2-4 color cytometer
1967，发展了一种液流束、照明光轴、检 测系统三者垂直的流式细胞仪
645DL
600DL 550DL
488BK 488DL
High Sensitivity Quartz Flow Cell
Forward Scatter Detector
氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光 488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光 器光谱多集中在可见光部分，以633nm较强。
数据分析
Positive cPeo lslitiv e
C ell
Negative CN eeglaltive
C ell
CD4 CPDEX PE
Traditional Analysis — Percent Positives
104
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CD4 PE
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100
101
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C D 3 F IT C
散射光信号
前向散射光信号 细胞大小
侧向散射光信号 细胞内颗粒
外周全血细胞散射光双参数点图
荧光信号
用荧光标记抗体
抗体特异性地结合细 胞上对应的抗原
FL1 – FITC FL2 – PE FL3 - PC7
表达该抗原的细胞被 标记上荧光；
抗原表达多的细胞荧 光强度强
阳性细胞百分 比或浓度
靶蛋白浓度
流式细胞术分析技术及应用
流式细胞术：Flow cytometry
流式细胞的发展史
1953年，Croslannd-Taylor 应用 分层鞘流原理，成功的设计红细 胞光学自动计数器 1949 年 Wallace Coulter 提出在悬液中 计数粒子的方法的专利 1934年，Moldaven 试图用光电仪 记录流过一根毛细管的细胞
FL1, FL2, FL3, FL4（荧光）
流式细胞仪光路图
Air-cooled Argon Ion Laser Beam Shaping Lenses
620BP FL3 (ECD) 575BP FL2 (PE) 525BP FL1 (FITC)
675BP FL4 (PC5)
Side Scatter Detector
荧光的产生
荧光素种类
FITC(异硫氰酸荧光素）：绿色 530nm GFP (绿色荧光蛋白) ：绿色 PE（藻红蛋白）：橙黄色 575nm PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色 PI(碘化丙啶）：橙红色 620nm APC(别藻兰蛋白）：红色 660nm
675nm
荧光产生过程
滤光片：Optical Filters
长通
460 500 540
短通
460 500 540
带通
460 500 540
LP 500
SP 500
BP500/50
光收集系统：光电倍增管（PMT）
荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光一般 由光电倍增管（PMT）检测。
细胞分选系统
激发光
- 电极板
单细胞收集管
数据显示 荧光检测器
+
流式细胞仪的细胞分选器通过喷嘴射出的液柱被分 割成一连串的小水滴，然后由充电电路对选定细胞液 滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转， 落入收集器中。
鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。
FCM的液流系统（如 何形成单个细胞流）
样本管
鞘液管
液流中心由单列匀速运动颗粒组成的液柱
为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由 于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。
光学系统
激光光源：气冷式氩离子激光器 分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长 光束成形器：两十字交叉放置的透镜 透镜组：形成平行光，除去室内光 滤片：长通、短通、带通 光电倍增管：FS, SS（散射光），