HPLC 法则定阿司匹林原料药中的残留乙酸
肖海燕1,2，王维红1，赵培新3
(1.山东大学医药学院，山东济南 250012；2.山东药品食品职业学院，山东淄博 255000；
3.山东新华制药股份有限公司，山东淄博 255000）
摘要：目的建立高效色谱法检验阿司匹林原料药中乙酸的方法。
方法采用HPLC法，ZORBAX SB—C
18
（4.6×250mm，5 µm）色谱柱，流动相(A)磷酸溶液（0.7mL磷酸于1000mL水中，用
1mol‧L-1氢氧化钠溶液调PH为3.0）-甲醇=950:50，（B）甲醇，梯度洗脱；检测波长为210nm；流速为1.2mL‧min-1。
结果乙酸在5～120µg‧mL-1的范围内具有良好的线性（r=0.99999，n=6），回收率为99.4%，精密度RSD=0.28%。
结论本方法快速，简便，准确，能满足阿司匹林产品测定乙酸残留的需要。
关键词：高效液相色谱法阿司匹林乙酸
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672-7738（2008）12-0720-02
Determination of acetic acid residue in aspirin by HPLC
XIAO Hai-yan1,2，WANG Wei-hong1，ZHAO Pei-xin3
（1.School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University , Ji’nan 250012;2.Shandong Drug and Food Vocational College, Zibo 255000;3.Shandong Xinhua Pharmaceutical Limited Company, zibo 255000）
ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC method for determination of acetic acid in Aspirin, METHODS HPLC with ZORBOX SB—C18 column(4.6×250mm，5 µm) the mobile phase consisted of (A)0.07%( mL‧mL-1) phosphoric acid (adjusted with 1mol‧L-1 sodium hydroxide to pH3.0)-methanol=950:50,(B) methanol; The detection wavelength was 210nm; The flow rate 1.2 mL‧min-1.RESULTS A good linear relationship was 5～120µg‧mL-1(r=0.99999,n=6), The recovery rate was 99.4%,RSD=0.28%. CONCLUSION The proposed method was sensitive, accurate and simple, and can be used for the determination of acetic acid residue in Aspirin. KEY WORDS: HPLC; aspirin; acetic acid
乙酸是生产阿司匹林的主要原料，用量较大，因此阿司匹林成品中会含有少量的残留乙酸，作为杂质影响产品质量。
本研究采用HPLC法[1,2],建立了阿司匹林原料药中乙酸的测定方法。
1 仪器与试药
LC—2010A高效液相色谱仪（四元泵、脱气单元、UV检测器、柱箱、自动进样器、系统监测器、CLASS—VP）（日本岛津公司）；供试品（生产厂家：山东新华制药股份有限公司，批号：0702238、0702250、0702256、0702258），甲醇（色谱纯），其余试剂为分析纯，水为自制新鲜双蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：ZORBAX SB—C18（4.6×250mm，5µm）；流动相：A：缓冲液（0.7mL磷酸于1000mL水中，用1mol‧L氢氧化钠调pH为
3.0）—甲醇=950:50，B：甲醇，梯度洗脱；检测波长：210nm；计算方法：外标法；流速：1.2 mL‧min-1；灵敏度：1.0 AUFS；进样量：55 µL；柱温为室温。
表1 梯度程序
时间（min）0→5 5→6 6→12 12→13 13→25
B (%) 0 0→50 50 50→0 0
在上诉色谱条件下，乙酸的保留时间约为3.6min（图1）,理论板数不低于2500，拖尾因子约为1.3。
阿司匹林峰与乙酸峰分离良好。
2.2 专属性试验取甲醇和样品液（取样品约0.2g，加甲醇溶解并稀释至10mL）分别进样，记录色谱图，色谱图中均无干扰峰出现，表明溶剂和阿司匹林样品均对测定无干扰。
2.3 线性及线性范围称取冰乙酸0.5005g，加甲醇配置一系列溶液，含冰乙酸约5、10、50、80、100、120 µg‧mL-1的甲醇溶液。
分别进样2次，记录色谱图，计
算线性方程。
得回归方程为Y=279X-10（r=0.99999，n=6），线性范围为5～120µg‧mL-1。
2.4定量限取精密度项下对照液，加甲醇溶解并稀释成含冰乙酸5µg‧mL-1的溶液。
进样2次，记录色谱图，色谱图中乙酸峰高约为基线噪音高的11倍，则本方法的定量限为5µg‧mL-1，即为0.025%。
2.5检测限取精密度项下对照液，加甲醇溶解并稀释成含冰乙酸2µg‧mL-1的溶液。
进样2次，记录色谱图，色谱图中乙酸峰高约为基线噪音高的3倍，则本方法的定量限为2µg‧mL-1，即为0.01%。
2.6稳定性试验取精密度项下对照液，于室温下放置0,2,4,6,8,10h后，分别进样5µL，乙酸峰面积的RSD 为0.39%，表明本方法的稳定性好。
2.7精密度取冰乙酸约为0.5mL（0.5028g），精密度称定于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度；取1.00mL，加甲醇溶解并稀释至50mL（含冰乙酸约为
100µg‧mL-1）。
连续进样6次，记录色谱图，乙酸峰面积的RSD为0.28%。
结果表明本测定系统精密度良好。
2.8中间精密度取冰乙酸约0.5mL（0.5035g），精密称定于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度；取1.00mL，加甲醇溶解并稀释至50mL（含冰乙酸约为
100µg‧mL-1）。
由另一位化验员，采用不同的仪器（LC —2010AHT），于不同的时间，取上述对照液连续进样
6次，记录色谱图，乙酸峰面积的RSD为0.19%。
结果
表明中间精密度能够满足方法测定的需求。
2.9回收率取精密度项下对照液连续进样5次，记录
色谱图；再分别取回收率测试液（称取冰乙酸0.5005g，加甲醇配制一系列溶液，含冰乙酸约为80、100、
120µg‧mL-1的溶液）各进样2次，记录色谱图，计算回
收率。
表2 回收率测定结果
测定
点
（µg‧
mL-1）
测定
平均
面积
计算
量
（µg‧
mL-1）
理论
量
（µg‧
mL-1）
对照
液面
积
回收
率
（%）
回收
率平
均值
（%）
80 22219 79.57 80.08
27951
99.4
99.4 100 27818 99.62 100.10 99.5
120 33309 119.28 120.12 99.3
2.10样品的测定取精密度项下对照溶液连续进样5次，记录色谱图，在分别取空白、样品液（取样品约
0.2g，精密称定，加甲醇溶解并稀释至10.0mL）各进
样一次，记录色谱图，以外标法计算样品中乙酸的残留样量，色谱图（见图2）。
表3 样品中乙酸残留测定结果
批号0702238 0702250070225107022560702258
乙酸残
留量
(%)
0.040 0.042 0.051 0.043 0.038
3 讨论
3.1本实验采用HPLC法测定阿司匹林原料药中乙酸含量，操作简单、快速，测定结果准确可靠，从而能有效地控制该药的质量。
3.2在流动相的选择上采用了梯度洗脱，否则样品出峰
时间过长。
3.3在主药的稀释溶剂选择上，考虑到阿司匹林原料药
不易溶于水且易水解，根据洗脱程序，选用甲醇作为稀释溶剂。
并比较了用流动相和甲醇作为溶剂进行了检测，发现两种供试品地色谱图中，检测结果无明显差异。
参考文献
[1]《中国药典》2005年版（二部）.北京；化学工业
出版社，2005.
[2]陈新善，孔爱英.HPLC法测定阿司匹林肠溶片中游
离水杨酸含量.中国药事，2003，17（8）:505～507。