10. 将瓶子放入高压灭菌锅中，于 121 ℃下保温 60 min，待温度降为室温的时候打开瓶盖。 11. 用烘干至恒重在干燥器中冷却并记录其重量的砂芯坩埚抽滤，所得滤液用来分析纤维素
半纤维素含量及酸溶性木质素，残渣则用来分析酸不溶性木质素。
12. 将坩埚放入 105 ℃烘箱中烘干至恒重（重量精确到 0.1 mg），再放入 575±25℃ 马弗炉 中烧 24±6 h。马弗炉的程序升温条件为：从室温升至 105 ℃，保持 12min，以 10 ℃ /min 的速率升至 250 ℃ 保持 30 min，以 20 ℃/min 的速率升至 575 ℃保持 180 min。 待温度降至 105 ℃的时候将坩埚取出放入干燥器中冷却并称重。（总灰分与酸不溶木素 灰分不同，这一步要测）
8. 将管中的物料转移到一个带盖的瓶子中，稀释酸的浓度至 4% ，所加蒸馏水包括冲洗水 在内共 84.00±0.04 mL 。
9. 移取糖回收标准液（SRS）10.00 mL 于另一瓶中，加入 348 µL 72% 硫酸。糖回收标准液： 即为单糖的 4% 稀硫酸溶液，用于折算糖稀酸、高温水解过程中变成其他物质，如糠醛 等的损失率。精确称取一定量的葡萄糖、木糖、阿拉伯糖于 100mL 容量瓶中，分装成 10 份，每份 10 mL，放入‐80℃ 超低温冰箱中保存，用时溶解后加入 348 µL 72% 硫酸溶液 即可。（可先测样品浓度，再回去参照该浓度配样算回收率）
6. 抽提完成后风干物料（如果湿，40℃同前条件预干燥） 7. 将物料加入带盖的管中（20mL 具塞试管），加入 3.00±0.01mL 的 72% 硫酸溶液并搅拌
1 min，将管盖好后放入 30±3 ℃的水浴锅中温浴 60±5 min，每隔 5-10 min 搅拌一
次，搅拌过程中保持管在水浴锅中。（全过程磁力搅拌就好）
实验结果：
标准单糖回收率葡萄糖
. .
1.034 标准单糖回收率木糖
. .
1.149
标准单糖回收率阿拉伯糖
. .
1.084
纤维素含量 . / .
. .
. . 35.61% (其中 0.9673 为稀释倍数)
半纤维素含量 .
.
.
.
.

.
. . 21.68% (其中 0.9673 为稀释倍数)
木质素含量=酸溶性木质素+酸不溶性木质素=3.67%+23.56%=27.23%
13. 酸溶性木质素的测定（6 h 以内测定）。取滤液稀释适当倍数后用分光光度计测其 OD 值
（0.7‐1），4%硫酸作为参比和稀释液。
14. 滤液用碳酸钙中和后进行 HPLC 法分析结构糖含量。用 Biorad Aminex HPX‐87H 柱对样品
进行分析的条件为：流动相为 0.005M 硫酸， 流速为 0.6 mL / min，进样量为 20 µL，柱
保留时间/min 8.857 9.472
单糖类别 葡萄糖 木糖
10.404 样品 2：
阿拉伯糖
MV
38.00 36.00 34.00 32.00 30.00 28.00 26.00 24.00 22.00 20.00 18.00 16.00 14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 -2.00
温为 55 ℃，检测器温度为 30 ℃，监测器为示差折光检测器，运行时间为 20 min。
15. 根据标准曲线算得样品中糖的浓度，进而算的纤维素半纤维素的含量。
16.
计算方法：W =W ‐W 酸不溶性木质素
坩埚+滤渣干燥后重量
马弗炉烧后坩埚重量
%酸溶性木质素
UVabs 0.08673 稀释倍数 ε 物料重 光程长
（其中ε为生物质在特定波长的吸收
能力，可查）
单糖浓度 C
CHPLC 稀释倍数 .
标准单糖平均回收率 Rave.sugar=稀 稀酸 酸处 处理 理前 后糖 糖液 液浓 浓度 度
纤维素%=C1g0l0u0
86.73 L 0.90 W 物料重量
100%
半纤维素%=（Cxyl100C0araW）物料86重.7量3L 0.88 100%
HPLC 图：
样 1：
MV
40.00 38.00 36.00 34.00 32.00 30.00 28.00 26.00 24.00 22.00 20.00 18.00 16.00 14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 -2.00
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 19.00 20.00 分钟
3. 粉碎物料，取 40 目‐60 目之间的木质纤维素。称取 300±10.0 mg，用滤纸包好放入索氏 抽提提取管中，使其低于虹吸管最高处。
4. 水抽：水溶性物质有无机物质；非结构性糖；含氮物质等，用索氏抽提法抽提 6‐24 h。 （根据木质纤维素特点决定需不需要进行水抽）
5. 醇抽：（水抽后将水倒干净后加入 95% 乙醇进行醇抽）醇溶性物质有叶绿素；蜡类或其 他微量组分，用索氏抽提法抽提 16‐24 h。（5g：200mL，看物料密度和抽提器高度）
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 19.00 20.00 分钟
NREL 测纤维素、半纤维素和木质素的含量的步骤
1. 测木质纤维素中的水分。用烘箱在 105℃下烘干至恒重（至少烘 4 h）测其含水量。 2. 如果木质纤维素中含有的水分高于 10%则需风干，在空气湿度较大或物料较湿的情况下
于不高于 40℃的烘箱内烘（恒重），如果含水量低于 10%则无需处理而进行粉碎,粉碎时 机器会产生热量对生物质有影响，所以一次粉碎时间不宜过长。