总可溶性酚和木质素含量的测定
1. 试剂配制
①80%甲醇：400 mL 甲醇，用蒸馏水定容至500 mL
② 1 N Folin-酚试剂（Folin and Ciocalteau's Phenol reagent)
③1 mol/L Na2CO3：称取105.99 g Na2CO3，蒸馏水溶解并定容至1000 mL
④邻苯二酚
⑤ 2 N HCl：83.3 mL浓HCl，蒸馏水定容至500 mL
⑥ 1:10比例的巯基乙酸和2 N HCl混合液：30 mL巯基乙酸（硫代乙醇酸），溶于300 mL 2 N HCl
⑦0.5 N NaOH：20.0 g NaOH，用蒸馏水溶解并定容至1000 mL
⑧浓HCl（12 mol/L）
2. 测定方法
酚类物质含量测定：分别在接种前(0 h)和接种后的1、3、5、7 d采集水稻的第3、4片叶，在-80℃下保存备用，用以测定总可溶性酚和木质素的含量。

参照Rodrigues等（2005）的方法。

0.1 g水稻叶片置于预冷研钵中，加入液氮研成粉末，转移到2 mL离心管中，加入1.5 mL的80%甲醇。

用锡纸包裹Eppendorf管，防止光氧化，在25℃下，用摇床150 rpm振荡过夜。

提取物在12000 rpm下离心10 min，上清液转移到1.5 mL离心管中，在-20℃下保存，用于总可溶性酚含量的测定。

沉淀在-20℃下保存，用于木质素含量的测定。

⑴总可溶性酚含量的测定
参考Folin-Ciocaileu比色法
①取上清液（甲醇提取物）150 μL，加入150 μL 1 N Folin-酚试剂（Folin and Ciocalteu's Phenol reagent)，摇匀，室温下保持5 min。

接着加入200 μL的1 mol/L Na2CO3溶液，摇匀，在室温下保持10 min。

向混合物加入1 mL双蒸水，摇匀，室温下（在暗处）保持1 h。

混合物在725 nm(或765 nm)下比色，测定吸光度。

用邻苯二酚（或没食子酸或原儿茶酸）做标准曲线，单位为μg·g-1 FW（或mg·kg-1 FW）。

②标准曲线的制备
准确称取邻苯二酚（M=110.11）0.05 g，蒸馏水溶剂并定容至50 mL，得1 mg/mL 邻苯二酚贮备液，吸取2.5 mL定容至50 mL得50 μg/mL邻苯二酚标准液。

⑵木质素含量的测定
向提取总可溶性酚得到的沉淀加入1.5 mL双蒸水，涡旋摇匀，在离心力为12, 000 g下离心5 min，丢弃上清液，将沉淀在65℃下干燥过夜。

将1.5 mL的1:10比例的巯基乙酸和2 N HCl混合液加入到干燥的沉淀中。

轻轻摇匀，沸水浴4 h后，立即置于冰水中冷却，4℃下保持10 min。

混合物在离心力为12, 000 g下离心10 min，丢弃上清液。

沉淀用1.5 mL双蒸水冲洗，接着在离心力为10,000 g 下离心10 min，离心后丢弃上清液。

沉淀用1.5 mL的0.5 N NaOH溶液重新悬浮，混合物在室温下用摇床(150 rpm)振荡过夜。

混合物在离心力为10,000 g下离心10 min，上清液转移到新的Ependorfg管中。

向上清液加入200 μL浓HCl，将Ependorf管在4℃下保持4h，使木质素-巯基乙酸衍生物（LTGA）充分沉淀。

接着在离心力为10,000 g下离心10 min，丢弃上清液，用2 mL 0.5 N NaOH溶解橙棕色沉淀。

在280 nm下测定溶液吸光度，用木质素标准品(Lignin alkali 2-hydroxypropyl ether)（Sigma-Aldrich, USA）作标准曲线，浓度单位用mg·kg-1 FW表示。