磁性标记和分选步骤：
1.制备无菌Buffers,冰上放置。

细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。

1×BD IMag™ buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag™ Buffer ，用无菌蒸馏水或加有
0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。

2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。

然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除
细胞簇和组织碎片。

用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。

3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x
106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。

4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体
2.4G2（BD Mouse Fc Block⇔ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞
添加0.25μg，然后冰浴15min.
5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell Enrichment
Cocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min.
6.用10x过量体积的1X BD IMag™ buffer洗涤标记细胞，300 ⋅ g离心7分钟并小心吸去
所有上清液。

7.彻底涡旋BD IMag™ Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。

8.混匀，然后6˚C - 12˚C冷藏30min.
9.用1X BD IMag™buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。

10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。

把这个
positive-fraction 管放到BD IMagnet™(水平位置)8min。

对于较大体积，可把细胞转移到17 x 100 mm圆底试管，添加的最大的体积不超过
3.0ml。

把这个positive-fraction 管放到BD IMagnet™(垂直位置)8min。

11.当管在BD IMagnet™上时，用无菌巴斯德吸管轻轻的吸取上清至一个新的无菌管内。

12.从BD IMagnet™取出positive-fraction 管，添加1X BD IMag™ buffer到与步骤8相同的
体积。

上下吹打10-15次，重悬positive fraction well，并重置于BD IMagnet™上6-8min.
对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet™上8min。

13.用一个新的巴斯德吸管轻轻吸上清和步骤10中的enriched fraction。

混合。

14.把含有结合enriched fraction的管再置于BD IMagnet™6-8min。

对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet™上8min。

15.轻轻吸出上清并置于一个新的无菌管内。

两次enriched fraction不含有bound antibodies
和磁性粒子。

细胞可用后续应用。

16.留在原管内的正选细胞可用适当的缓冲液或培养基重悬以备后续应用，包括流式细胞系
检测。

17.未分离的细胞悬浮液样品和正选富集positive and enriched fractions的样品，应用流式细
胞仪评估细胞分离效率。