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CD90磁珠分选protocol

CD90磁珠分选protocol
1.吸去培养基,PBS吹洗一遍
2.加入1-2ml胰酶,消化5-10分钟后加入2ml培养液中和后吸至15ml离心管
3.300g,5min,弃上清
4.加入500μl MACS buffer,重悬后离心,300g,10min,弃上清
5.加入500μl MACS buffer,重悬,吸取20μl计数,其余的悬液300g,10min
离心后弃上清,每107细胞加入20μl beads,80μl MACS buffer,混匀
6.计数选择对角线的四个方格,总数除以4乘以2,单位为104个
7.放入冰箱(2-8℃)15min,每隔5min震荡混匀一次
8.加入500μl MACS buffer,过磁柱,加入500μl buffer 于15ml离心管内洗2

9.15ml离心管里的为CD90-OF(总体积1.5ml),留在磁柱上的为CD90+细胞,
加入1ml buffer冲洗至15ml离心管。

10.每管悬液离心后弃上清,加入4ml 培养液后,铺至2个10cm培养皿;。

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