红螺菌培养基:
1、富集培养基:
经典的紫色非硫细菌(红螺菌)的富集培养基的配方为:NH4Cl:0.1g;NaHCO3:0.1g;K2HPO4:0.02g;CH3COONa:0.1~0.5g;MgSO4·7H2O:0.02g;NaCl:0.05~0.2g;生长因子1ml,蒸馏水97ml,微量元素溶液
1ml,pH为7.0。
其中,①5%NaHCO
3
水溶液,过滤除菌取2m1加入无菌培养基中。
②生长因子:维生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、对氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg,以上药品溶于蒸馏水中,定容至10ml,然后过滤除菌。
③
微量元素溶液:FeCl
3·6H
2
O :5mg;CuS0
4
·5H
2
O:0.05mg;H
3
BO
4
lmg;
MnCl
2·4H
2
O:0.05mg;ZnSO
4
·7H
2
O:1mg;Co(NO
3
)
2
·6H
2
O: 0.5mg。
以上药
品分别溶于蒸馏水中,并定容至1000m1。
除①、②、③外,各成分溶解后100 Pa灭菌20min。
然后分别加入①、
②、③,如加入0.1%~0.3%的蛋白胨则能促进该菌生长。
2、分离培养基:
传统的红螺科分离培养基的配方为:NH
4Cl:0.1g; MgCl
2
:0.02g;酵
母膏:0.01g; K
2HPO
4
:0.05g; NaCl: 0.2g;琼脂2g,蒸馏水90ml。
100Pa灭菌20min。
灭菌后,无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO
3
,再无菌加入过
滤除菌的0.1g或0.1mlNa
2S·9H
2
O(降低培养基的氧化还原值),最后再加
入5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4%丙氨酸。
用过滤灭菌的0.1mol/H
3PO
3
调pH至7.0。
摘自百度知道。
筛选富集培养基为: NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏0.5g/L, 微量元素母液1g, 自然pH值。
扩大培养培养基以海水代替微量元素母液。
1000~4000lx光照, (30±2)℃恒温培养。
参考文献:固定化海洋光合细菌处理生活污水的研究* 黄宝兴,李兰生,赵亮,张微,唐迎迎海洋湖沼通报
基础培养基:NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g ; 乙醇2ml,用0.1N H3PO4调至pH7.0。
划线培养基:采用固体琼脂培养基,即在基础培养基的基础上添加1.0%的琼脂。
以上培养基初始pH值均用H3PO4调至7.0,经121℃灭菌30分钟,NaHCO3过滤除
菌后加入。
培养条件:光照培养箱温度控制在30℃、光照强度控制在3000uE.m-2s-1培养。
光合细菌是一种兼性嫌气细菌,需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态,一般将混合菌放入培养液中先富集再分离。
具体方法:将混合菌装入10ml试管中,加入培养
液充满至刻度,盖上胶塞,在光照条件下保持在30℃左右培养。
待培养液出现红色后,取培养液加1.5%的琼脂,制成固体培养基,取菌液分别用无菌水以10-100000000倍稀释,分别取lml样本涂在平皿上,光照、30℃培养2d左右在平板上长出菌落。
移至平板采用划线法进行分离,将划好线的平板倒置,在相同条件下培养,反复分离纯化,挑取不同特征的菌落,用斜面保存,纯化分离后的菌种置于冰箱保存备用。
PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外,还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素,将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。
本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基,基本配方为:CaCl2 0.3g,MgSO4·7H2O 0.5g,酵母膏3g,蛋白胨3g,蒸馏水1000ml,pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。
培养温度:25℃~30℃最佳,光照强度:2000LX~5000LX,PH:7.5~8.5最佳。
把菌种接种到灭好菌的培养基中,在三角瓶中进行二级培养,每天摇晃几次。
把40L 的反应器中加满自来水,放入通气管,盖上保鲜膜一起用次氯酸杀菌消毒24小时,用硫代硫酸钠(1L次氯酸需要150g硫代硫酸钠)来中和。
以15%的接种量接入反应器中,用泵通气培养,用分光光度计跟踪测量菌液的密度,得到菌液的密度较高,而且反应器还可以进一步放大。
参考文献:光合细菌的培养及应用魏玉利
参考文献:
2.5.1.1 灭菌条件
(1)高压蒸汽灭菌小件玻璃器皿、培养基等采用湿式高压蒸汽灭菌。
这种灭菌方式可以达到彻底的灭菌。
灭菌条件:0.103 MPa,120 ℃,20min。
(2)紫外灭菌无菌操作台采用紫外灭菌方式,用紫外灯灭菌30min。
该种方式对空气进行灭菌。
2.5.1.2 光合细菌的纯培养
本课题研究所用光合细菌为Z08,除特殊说明外,皆是由纯培养获得。
将50 mL HCH 培养基灌装于250 mL 三角瓶,用封口膜将瓶口密封,以防止灰尘和杂菌进入。
灌装好的培养基采用高压蒸汽灭菌20 min。
待冷却以后,在无菌操作台中接种OD660=1.0(干重840 mg/L)的Z08 15 mL。
接种后将菌液放置在140 rpm 的恒温摇床中培养,控制温度30 ℃,24 h 照明,照度500—1000 lx,培养48 h 达到稳定期。
培养后的光合细菌保存在4
℃条件下备用。
红色非硫光合细菌富集培养基的配制: NaHCO3 1.0 g; NH4Cl 1 g; K2HPO4 0.2 g;
CH3COONa 1.0~5.0 g;MgSO4·7H2O 0.2 g; NaCl 0.5~2.0 g;酵母浸汁0.1 g;微量元素10 mL。
将上述成分溶于蒸馏水中,调节pH至7.0,定容1000 mL。
在115℃下灭菌20 min。
参考文献:光合细菌菌体分离回收以及实现啤酒废水资源化的研究戴晓
光合细菌的分离与培养
①液体富集培养基:CH3COONa 3.0 g ,CH3CH2COONa 0.3 g,NaCl 1.0 g,(NH4)2SO4 0.3 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,K2HPO4 0.7 g,CaCl2 0.05 g,MnSO4 0.0025 g,FeSO4 0.005 g,酵母膏
0.1 g,谷氨酸1.0 g,蒸馏水定容至1 L,调pH 至7.4。
②固体分离培养基:CH3COONa 3.0 g·L-1,酵母膏3.0 g·L-1,CaCl2 0.3 g·L-1,MgSO4·7H2O
0.5g·L-1,琼脂20 g·L-1,调pH7.4。
培养条件:取少量活性污泥样品于装有120 mL 富集培养基的125 mL 血清瓶中富集,置于光照培养箱中30 ℃培养,照度为2000 1x。
6~9 d 后,液体培养基变为红色,经摇床振荡稀释处理后,涂布和划线于平板固体培养基上,置于恒温培养箱中黑暗好氧培养,7 d 后获得单菌落。
在平板固体培养基中重复划线3 次以上,直到在显微镜下观察为纯菌。
参考文献:一株光合细菌的分离鉴定及污水处理能力研究周洪波,刘飞飞,邱冠周
1·2培养基
优化培养实验采用RCVBN扩大培养基,其组成为:CH3COONa 3.0g, (NH4)2SO4 1.0g, MgSO4 0.2g, NaCl 1.0g, KH2PO4 0.3g, K2HPO4 0.5g, CaCl2 0.05g, 酵母膏0.1g, 微量元素溶液1mL, 蒸馏水1000mL.
微量元素溶液为改良的Imhoff和Truper生长因子溶液,其组成为: EDTA-2Na 2g, FeSO4·7H2O 0.2g, MnCl2·4H2O 0.1g, H3BO3 0.1g, CoCl2·6H2O 0.1g, ZnCl2 0.1g, Na2MoO4·2H2O 0.02g, NiCl2·6H2O 0.02mg, CuCl2·2H2O 0.01g, 蒸馏水1000mL。
1·3培养方法
在8个CSTR光合培养器中进行分批培养,培养器体积为50 L。
培养器光照根据强度不同的需要分别由三只25W,40W,60W,100W白炽灯泡组合提供,培养器的底部设有穿孔曝气管,根据DO含量间歇开启,培养器内设有温控器。
参考文献:应用于废水处理的光合细菌优化培养和生长动力学研究熊万永,林君锋,李玉林参考文献:有效微生物菌群的构建及处理苯酚与焦化废水的研究
2.1.2.2分离用固体培养基
在液体培养基中加入2%的琼脂,其它成分不变。
2.1.2.3鉴定用培养基
去掉富集用液体培养基中的苹果酸,而保留其它成分,分别加入经滤器除菌的最终浓度为0.2%的各种碳源和电子供体物质。
其中较知名的培养基为HCH光合培养基和V AN Neil培养基两种。