8 植PL物AN遗T传G转E化NE体T系IC的TR建A立NSFORMATION
8.1 植物基因转化的受体 8.1.2 悬浮细胞
以悬浮细胞作受体的转化方法包括农杆菌介导法、基因枪法、 PEG介导法、电激法和显微注射法等。
小麦幼胚悬浮细胞用JQ-700基因枪法转化，得到了GUS基因瞬间表 达的各项最适参数。他们还建立了‘冀谷11号’谷子幼穗的悬浮培 养细胞系及植株再生体系。将胚性悬浮细胞系接种到MS培养基， 20d继代1次，直至出现绿芽点；然后转入无激素的MS0或1/2 MS0 培养基分化植株。以基因枪轰击转化悬浮细胞后，放置48h，检测 GUS短暂表达频率TTF％为20％-40%；在添加200mg/L卡那霉素 的MS培养基上，有5％-10％的愈伤组织具有抗性，且能稳定传代 (董云洲等，1998)。
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经过十多年来得探索，基因转化的技术日臻成熟，已经形成了以农杆 菌载体转化和基因枪转化技术为主体的两大植物基因转化系统。这两种 转化系统机理清楚、证据确凿，成功的例子最多，约占已获转基因植物 的90%以上 。
8 PLANT GENETIC TRANSFORMATION
学习后的感受：
1.植物遗传转化受体？ 2.植物遗传转化方法？ 3.转基因植株的再生？ 4.转基因植株的检测？
8 PLANT GENETIC TRANSFORMATION
教学目的与要求
了解植物遗传转化的受体，以及植物遗传转化的方法与原理。
自1983年第一个转基因植物问世以来只有20多年的时间，但植物基因 工程的发展日新月异，硕果累累。将外源基因人为导入天然植物中，从 遗传物质水平上对植物进行有目的改造，由此获得转基因植物，其性状 将按着有利于人们需要的方向发生改变。植物基因工程具有得天独厚的 优势是植物细胞的“全能性”理论。这是动物细胞所不能比拟的，其次 是植物基因工程不会像动物或人类基因工程那样遇到较多的社会、伦理、 道德等问题。植物基因工程为育种开辟了一条崭新的途径。
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8.1 植物基因转化的受体 8.1.1 原生质体
原生质体是无细胞壁的细胞。与悬浮细胞一样，被转化的受体是 单个独立的细胞，为选择遗传均一性的转基因植株提供了可能性。
水稻广亲和品种‘02428’的原生质体用聚乙二醇(PEG)法导入具 有潮霉素B(HPT)抗性基因、卡那霉素抗性基因(KanR)和昆虫荧光 素酶基因(Luc)的质粒 pTHL27DNA，在含有25μg/ml潮霉素B和 100μg/ml卡那霉素的培养基KPR和N6上连续培养处理4周，可以 很好地除去非转化的敏感的原生细胞；然后在无抗菌素选择压力的 培养基中，转化细胞可再生植株(杨歧生等， 1996)。
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8.1 植物基因转化的受体
植物基因工程中，我们把接受外源(目的)基因的生命 体系称为“受体”。尽管接受外源基因的受体包括叶圆 片(盘)、胚性愈伤、胚状体、愈伤组织、悬浮细胞、原 生质体等不同的形态，但其基本形态还是细胞。其中， 叶圆片与农杆菌共培养是最简单的转化方法；愈伤组织 的转化效率高、生长速度快，是快速检测外源基因表达 的最好受体；原生质体则是单克隆转化的最佳材料。
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8.1 植物基因转化的受体 8.1.5 叶圆片
叶圆片(叶盘)是农杆菌转化的主要受体。采取新鲜植 株 上 无 菌 的 幼 嫩 叶 片 ， 用 打 孔 器 或 解 剖 刀 切 取 直 径 35mm 的 叶 圆 片 ， 在 液 体 培 养 瓶 中 与 农 杆 菌 共 培 养 2030min，其间轻轻摇动使农杆菌从切口侵入叶片。然后 将共培养后的叶圆片在滤纸上吸干，转移到非选择性培 养基上培养3d，再转入含卡那霉素或羧苄青霉素等抗生 素的选择培养基上培养，诱导植株再生，这样可获得遗 传均一性较高的转基因植株。
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8.1 植物基因转化的受体 8.1.4 胚状体
胚状体是由愈伤组织经过改造后分化而来的，其转化方法也同愈 伤组织。
用根癌农杆菌LBA4404介导番木瓜环斑病毒外壳蛋白（PRSV-CP）与 核酸酶（Nuclease）嵌合基因，通过振动共培养法转化番木瓜子叶 型胚状体，在选择培养基上筛选诱导再生转基因植株。NPT II分析 和Southern blot分子杂交结果表明，PRSV- CP- Nuclease嵌合基因 已经整合到番木瓜核基因组中（周鹏等，1995）。
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8.1 植物基因转化的受体 8.1.5 叶圆片
叶盘法常见于双子叶植物的遗传转化，马铃薯“东农303’’的叶盘 用含有质粒pPZH1和辅助质粒pGV2260双元载体的根癌农杆菌菌 株C58C1进行转化，在选择培养基上培养30d后，叶盘切口形成抗 性愈伤组织，转化率为4％-38％；经NPT II酶活性分析和DNA分子 杂交证实获得了转基因再生系IC的TR建A立NSFORMATION
8.1 植物基因转化的受体 8.1.3 胚性愈伤组织
愈伤组织的转化方法也适用于胚性愈伤组织。胚性愈伤组织的转 化已在玉米、甘蔗、芹菜等植物上获得成功。
芹 菜 胚 性 愈 伤 组 织 用 根 癌 农 杆 菌 C58C1 (pBZ6111) 感 染 后 ， 在 MS+2,4-D 1mg/L十KT0.1mg/L培养基上继代培养。在筛选到的氯霉素 抗性愈伤组织中检测到胭脂碱合成酶活性，表明外源基因已整合到 芹菜细胞基因组中并得到表达。抗性愈伤组织可在无激素的基本培 养基上增殖，但分化出的再生植株畸形(郑世学等，1996)。