病毒学的儿个概念:PFU MOI TCID50
PFU:plaque forming unit,空斑形成单位。
感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。
由于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始米用TCID50方法来计算病毒的感染单
位。
因此建议也可使用TCID50法。
MOI :multiplicity of infection ,感染复数。
传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。
其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值,也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。
噬菌体的数量单位为pfu。
一般认为MOI是一个比值,没有单位,其实其隐含的单位是pfu number/cell。
后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中,含义是感染时病毒与细胞数量的比值。
然而,由于病毒的数量单位有不同的表示方式,从而使MOI产生了不同的含义。
能产生细
胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量,因此其MOI的含义
与传统的概念相同。
传统意义上的MOI的测定,其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件,遵循Poisson分布规律,可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数( MOI)。
其公式为:丁
P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP ( 0 )。
其中:
P为被感染细胞的百分率
P(0)为未被感染细胞的百分率
m为MOI值
例如,如果要感染培养皿中99%的培养细胞,则:
P(0) = 1% = 0.01
m = -In (0.01)= 4.6 pfu/cell 。
TCID50 Protocol :
1 制备96孔板单层细胞
将病毒做系列稀释,横向接种单层细胞板,每稀释度重复
每日观察细胞病变,记录高于50和低于50%病变孔的病毒稀释度,
计算比距,获得TCID50
计算比距:
(高于50%的病变率—50%) / (高于50%病变率—小于50 %病变率)=比距;比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加,就获得了指数。
比如:比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50在10的负7和8次方之间,那么,指数一8
与比距相加,获得的新的指数,就是TCID50的指数,TCID50=10的-7.几次方
TCID50 与PFU 换算:PFUs = 0.7 >TCID50 的滴度。