洗时间约20～30分钟。再用高浓度甲醇（含甲醇
85%以上）溶液冲洗，约30～60分钟（注：不能直
接用有机溶剂冲洗，盐类易析出，堵塞色谱柱，
造成色谱柱永久性损坏；所用水最好是重蒸馏的
水。必须抽滤和脱气）。 最后用纯甲醇冲洗约10 分钟，以保存色谱柱。
（2）不含盐的流动相的冲洗方法：操作结束
后，先用流动相冲洗约10～15分钟，再用
泵”电源、检测器电源和工作站。
2.稳定柱压：换上流动相，将滤头放入流动相中，
开始下列操作：脱气、清洗、调流速。
（1）脱气：打开放空阀，按仪器前面板的[冲洗]
功能键，用大流量冲洗系统，直到流出的液体连
续，证明气泡已经排除；按[冲洗]功能键，关闭
放空阀。
（2）调流速：根据检品要求调“流速”，未
明确“流速”的检品，调流速使柱压在适 宜范围内（不得超过40MPa）。 具体操纵：按“△”或“▽”键，屏幕 显示“MENU1”后按“△”或“▽”输进数
对照品溶液的制备：取2，3，5，4’-四羟基二苯 乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷对照品适量，精密称定， 加稀乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀 乙醇25m1，称定重量，加热回流30分钟，放冷，
再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，
流动相的配制
1. 根据各药品项下规定的配制方
法，配制各种流动相，用微孔滤
膜（φ0.45μm）过滤。水系溶 液用水膜过滤，有机溶剂（或混 合溶剂）用有机膜过滤。 2. 脱气：配好的流动相需要洗脱 排气泡。方法：用超声波清洗器 超声排气泡，时间约10～20分钟。
开
机
1.打开电源，待电压稳定后，依次打开“高压输液
字至所需流速和最高和最低压力,再按“确
认”键。然后启动泵看压力是否超过范围。

（3） 调波长：根据检品要求调“波长”。 方法：打开“检测器”电源，按“操纵菜 单”键,屏幕显示 “MENU1”后按“△”或 “▽”键进行波长设定,设定是按数字键后 按 “确认”。
打开色谱工作站[ONLINE]
1.设置分析方法：根据检品所需设置分析方法（或直接调出 本检品已保存的方法）等待进样。 2.进样：待色谱工作站中的基线平稳后，进样。用仪器配备 的进样器，或用一次性注射器（进样器使用之前要用纯化 水及供试品润洗2-3次），吸取一定量的待检液（不少于 20ul。因进样器定量环自动控制在20ul。），进样阀处于
含5%甲醇的水冲洗10～20分钟。最后用高
浓度甲醇（含甲醇85%以上）溶液或纯甲醇 冲洗，时间约20～30分钟（注：不能直接 用纯水冲洗，易造成压力过高，活动停止。 所用水最好是重蒸馏的水。必须抽滤和脱 气）。
关闭计算机和检测器
实验完毕及时关闭检测器（便于保护检测
器，甚至可延长检测器的寿命）；根据提 示依次关闭桌面，最后关闭工作站，泵系
用流动相或样品的溶剂，3～5次，再用甲
醇冲洗，3～5次；再旋动进样阀按上法冲
洗，3～5次；最后把进样器上的进样针拔
掉，安上配备的冲洗头（白色的圆形配件） 用甲醇冲洗3～5次，即可。将进样针插到 进样器上保存，盖好红色保护盖。
2.色谱柱的冲洗
（1）含盐的流动相的冲洗方法：操纵结束后，先用
纯化水或含甲醇5%（最高浓度不超过20%）的水冲
静置，上清液滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试 品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定， 即得。
注：本品按干燥品计算，含2，3，5，4’四羟基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷
(C20H22O9)不得少于1.0％。
依利特 P230/UV230+/EC2000型效 液相色谱仪操作规程
2．试药：何首乌、2，3，5，4’-四羟基二苯 乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷对照品、乙腈、稀 乙醇。
三、实验内容
避光操作。照高效液相色谱法(附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键
合硅胶为填充剂；以乙腈一水(25：75)为流动相；
检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4’-四羟 基二苯乙烯-2-O-β-D一葡萄糖苷峰计算应不低于 2000。
LODE处，进样，然后快速扳动进样阀手柄，到INJECT状态，
仪器自动启动数据采集。 注意：进样前基线要走平稳，且检测器已预热半个小时。
3.等样品分析完毕后基线平稳，方能结束数
据采集。
4.打印结果：点“报告”项下的打印信息设 置选项，进行信息设置后。点击“文件” 菜单先预览，再打印。
冲
洗
1.进样阀的冲洗：将进样针插进进样器，先
统。
清
理
每次操作完毕后，应及时清理所用物品，
废液倒到废液容器内，所用的玻璃仪器及
时送到洗刷池。实验台面、仪器表面用柔
软的抹布擦拭干净，时刻保持实验台和仪
器的整洁。
药物分析与检验技术 实训讲义
实训十六
中药何首乌中二苯乙烯苷 的含量测定（HPLC法）
一、目的要求
1．掌握中药有效成分的HPLC法测定方法及一
般操作规程。
2．熟悉高效液相色谱仪的使用方法及其操作
注意点。
二、仪器与试药
1．仪器：高效液相色谱仪、容量瓶、具塞
锥形瓶、移液管、电子分析天平、球形冷凝
管、电热套。