《植物组织培养》实验报告
学院：生命科学学院
班级：2014级生科一班
姓名：郭涛
学号：2014506063
植物组织培养
摘要：植物组织培养是根据植物细胞全能性理论发展起来的一项无性繁殖新技术，又称为离体培养。

广义的组织培养是指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。

狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

关键词：植物组织培养、细胞全能性、初代培养、继代培养
前言
新兴的植物组织培养技术其优点也较多，例如组织培养占用空间小，不受地区、季节限制，培养周期短，可短时间内大量繁殖某种植物，投资少，经济效益高等等。

植物组织培养还可用于拯救濒危植物，用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品，解决有些植物产种子少或无的难题等很多的领域。

掌握组织培养的基本技术是很有必要的。

1.实验原理
1.1植物组织培养
植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。

植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。

这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。

1.2植物细胞的全能性
植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。

1.3组织的分化与器官建成
外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。

有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。

1.4培养基的组成
培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。

营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。

2.材料、试剂和仪器
2.1材料：胡萝卜、李子花、李子的茎段、李子叶片
2.2试剂：70% 酒精、 0.1% 升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、蔗糖、琼脂等。

2.3仪器：高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养皿、镊子、记号笔、剪刀、酒精灯等。

3.实验步骤
3.1培养基母液的配制
分别配制好各种母液包括大量元素、CaCl2.2H2O、微量元素、有机物、以及生长调节物质如NAA、2，4-D、6BA。

3.2培养基的配制
将称好的琼脂加入容器内加入蒸馏水，加热溶解至完全，再加入蔗糖溶解，随后加入各种母液，混合均匀后调节PH值至5.8 ~ 6.0。

3.3高压蒸汽灭菌
具体步骤为：
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀→0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。

3.4初代培养
3.4.1准备
打开超净工作台，将镊子酒精灯放如超净工作台中，用紫外灯照20min后关闭紫外灯，同时将植物组织用自来水冲20min。

走进工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处，并搽拭工作台面。

点燃超净工作台的酒精灯，适当灼烧镊子，剪刀，刀片等工具。

将灭菌溶液，无菌水，等放入超净工作台。

3.4.2灭菌
在超净工作台上取经浸泡处理的豌豆，先用酒精倒入种子瓶中约2／3消毒一次（1-2s）接着用无菌水冲洗一次。

再用酒精摇晃清洗清洗 3 次，每次 5 分钟，清洗完后用无菌水冲
洗一次。

而后用 HgCI 泡5min，处理 2 次，每次 3 分钟。

后用无菌水摇晃清洗 4-5次。

3.4.3接种
将灭菌处理好的材料在超净工作台上用镊子靠近酒精灯的外焰放入向下倾斜的培养瓶中，每个瓶内装3～4块植物组织，接种过程中培养瓶口应一直保持向下倾斜，直到接种完毕盖上盖子。

接种完毕后要清理干净工作台。

3.4.4标记
接种完毕后，给培养瓶贴上标签，放入培养架上。

3.5继代培养
从初代培养物中选取愈伤组织分化较好无污染的材料，在超净工作台中将其接种至继代培养基中，并标记，置于黑暗中培养。

隔一定时间观察愈伤组织长势。

4.结果与讨论
4.1培养结果如下：
2016.4.20 初代培养一周后：
李子花、李子叶片李子茎段
胡萝卜
2016.04.27继代培养记录：2016.05.11继代培养观察：
2016.05.27继代培养观察：
4.2讨论
通过此次实验，我自己又总结了一些实践经验：
（1）实验开始前要自己认真的了解实验过程以及每一步的原理，这样，既不会再步骤中出错，而且，可以大大减少每一步中出现的差错或者意外因素对实验造成的影响。

（2）实验过程中要静下心来，细心仔细地完成每一步。

（3）此次试验中很重要的一步即是对外植体的灭菌过程，既不能灭菌时间过长对外植体早成伤害，又不能时间过短，灭菌不完全，而且可以搭配集中灭菌试剂，综合使用。

在接种的过程中也要格外注意无菌操作，这些都是实验成功地基本前提。

本次实验有成功之处，亦有不足之处。

在愈伤组织诱导培养时，因为操作上的不严谨性等多种原因导致结果不理想，但在继代培养时，我深刻体会到了实验细节的重要性，因此，继代培养初期，取得了较好的结果，但还是由于粗心大意，使外植体的长势出现了下降趋势。

通过本次实验，我深刻认识到了严谨的科学态度的重要性，理论与实践是不可分割的，在理论学习的同时，还需要认真的进行实验。

参考文献
[1]. 李浚明，朱登云.植物组织培养（第3版）.中国农业大学出版社.2005,2.
[2].王连清主编.植物组织培养.北京：中国农业出版社，2002.
[3].潘瑞炽主编. 植物组织培养（第三版）.广州：广东高等教育出版社，2003.
[4].曹孜义，刘国民主编. 实用植物组织培养技术教程.兰州：甘肃科学技术出版社，2001.
[5].郭勇，崔堂兵，谢秀帧编著. 植物细胞培养与应用.北京：科学出版社，2004.。