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同源重组的分子机制


第六章 同源重组的分子机制
Holliday模型同样适用于环状DNA间的重组 两个环状DNA分子配对、断裂、重接形成“8”字 型结构中间物,根据切割的位置不同,可分别形成两 个亲本环、大的单体环或者是滚环结构,也可以形成 “χ” 结构。
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4. 形成交联桥结构;
5. 分支迁移:形成一大段异源 双链DNA(Holliday结构)
4 5 7
6. 绕交联桥旋转1800,形成 Holliday异构体;
7. 切开与重接: 左右切,形成非重组体 上下切,形成重组体。
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(1) 5’ A 3’ 3’ 5’ a (2) 5’ A 3’ 3’ 5’ a
b a
(10)
A B
A B
b (5) 5’ A 3’ 3’ 5’ a a (11) A B A
b a b
a (6) 5’ A 3’ 3’ 5’ a (7)
b
a
B
A
B
A
b
a
b
a
B
a
b
支持Holliday遗传重组模型的证据: 1、形态学上,Holliday中间体(Chi 结构)的电镜照片;
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第六章 同源重组的分子机制
5´ 3´ 3´ 5´
3´ 5´ 5´
内切酶
3´ (recBCD)
3´ 5´ 5´ 3´
5´ 3´ 5´ 3´
3´ 5´ 3´ 5´ 3´ 5´
DNA侵扰 (recA)
5´ 3´ 3´ 5´ 3´ 5´ 5´ 3´
5´ 3´ 3´ 5´
置换延伸 (recA)
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三、Meselson – Radding模型
Holliday 模型中为对称的杂合双链,而实际情况有 不均等分离现象,1975年Meselson-Radding 提出模型解 释这种不对称重组现象;
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修复校正:若一个杂种分子被校正为野生型(突变型),另一个未被校正
内切酶 (recBCD)
5´ 3´ 3´ 3´
3´ 5´ 5´ 3´
DNA 连接酶
5´ 3´ 3´ 5´
3´ 5´ 5´ 3´
Holiday中间体
5´ 3´ 3´ 5´
分支迁移(Ruv AB) 内切酶 (RuvC)
3´ 5´ 3´ 3´
3´ 5´ 5´ 3´ 5´ 3´
3´ 5´
5´ 3´
3´ 5´
+/+ +/g +/g g/g
+ + + + + g g g
+ + + + g + g g
>>
+ + g + + + g g
+ + + g + + g g
三型子囊
四型子囊
Meselson-Radding 模型
困难
(五) 基因转变与高度负干涉
负干涉:两个邻近基因,或者是同一基因不同突变点间, 双交换的频率比预期高,并发系数C>1,即一个区域
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游离的3'单链末端
形成Holliday连接体
单链侵入并置换
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Ruv AB复合物结合于Holliday连接体
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Ruv C 蛋白切开 Holliday连接体
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1
2.
断裂重接模型
3. 1.
4. 2.
模板选择复制 模型
3.
4.
图 23-3 断裂重接模型和模板选择复制模型的比较
哈工大-遗传学 第六章 同源重组的分子机制
断裂重接模型和模板选择复制模型存在的问题
断裂重接模型:不能解释基因转变和极化子现象;
模板选择复制模型: (1) 违背了半保留复制; (2) DNA复制在S期,重组在偶线期,不应同时发生; (3)不能解释3线和4线交换;
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+ pdxp
×
pdx +
585个子囊中
子囊 孢子对

1 2 3 4 + + + pdx pdxp pdx + pdxp + pdx + +


+ + + + pdx + pdxp + +

pdx + + pdx + pdxp + +
?
+
pdxp pdx
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1 6
2 3 旋转1800
4 5 7
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A A a a
G
B
A
G
b
A
C T
B
b b
A
a a
A
C T
b
B B
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Holliday 模型中,由于重组而产生的异源双链区存在 不配对碱基,可被细胞内的修复系统能够识别并以一条链 为模板进行切除修复: (1). 两个杂种分子均未得到校正,有丝分裂后分离形成4:4 或 3:1:1:3的异常孢子分离比,属于半染色单体转变;
(2). 一个杂种分子得到校正,另一条未校正,有丝分裂后 分离形成 5:3 或 3:5 的分离比,属于半染色单体转变; (3). 两个杂种分子都被校正到同一种类型,有丝分裂后分 离形成 6:2或2:6 的分离比,属于染色单体转变; (4). 两个杂种分子都被校正到不同类型,有丝分裂后分离 形成 4:4 分离比,未出现基因转变;
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②存在8个碱基组成的重组热点(Chi位点): chi 位点 5' GCTGGTGG 3' 3' CGACCACC 5' ③需要几种重要的蛋白质:
RecBCD复合体:具有核酸酶,解旋酶和ATPase活性,在
Chi位点产生单链 3'游离未端; RecA:促进DNA单链的同化,即促进单链与同源双链分子 发生链的交换; RuvAB复合体:促进分支迁移; RuvC:核酸内切酶,切开重组中间体(Holliday连接体);
m1 + m1 + + m2 + m2
未转变
m1 + + + + m2 + m2
单转变
m1 + m1 + m1 + + m2
共转变
m1 + + m2 + m2 + m2
共转变
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极化子:距离单链断裂点的位置越近越容易发生基因
转变,越远越不易发生转变,由此基因转变频率由高
B 3’ 5’ 5’ b 3’ 联会 B 3’ 5’ 5’ 3’
(8)
A B 两臂旋转 b a
b 酶切 B
(9)
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A B
(3) 5’ A 3’ 3’ 5’ a (4) 5’ A 3’ 3’ 5’ a
3’ 5’ 5’ b 3’ 游离端移动联会 B 3’ 5’ 5’ b 3’ 游离端交叉连接 3’ 5’ 5’ b 3 形成单链交叉 3’ 5’ 5 b 3’ 分支点移动 B A B B
图 23-15 RecBCD 核酸酶从一侧接近 chi 顺序,当它前进
RecA蛋白介导的DNA链交换模型
1). RecA蛋白与单链DNA结
合,形成螺旋状纤丝; 2). 螺旋状纤丝与同源双链 DNA结合; 3). 螺旋状纤丝中的单链(入 侵单链)与双链中的互补链配 对,同源链被置换出来;
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(二)、细菌同源重组的机制---接合和转导(双链和双链)
RecBCD 结合在双链断裂处 chi 5’ BCD 3’
RecBCD 解链并作为外切酶降解 DNA chi RecBCD 停留在 chi 处,内切酶切开单链
RecD 在 chi 顺序解离
RecBC 继续作为解链酶
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(四)、细菌修复系统对异源双链区的校正: ①切除外源DNA——无重组
②切除受体DNA——发生重组
③无修复作用 ——子代细胞出现两种基因型(受体基因型 和重组体基因型) 通常采用有利于重组体基因型生长的选择条件
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• 高效率标记(high-efficiency maker):在转化中,有些遗传 标记或是很少发生校正作用,或是校正切除几乎总是在受 体DNA上,因此转化频率较高,这类遗传标记称为~。 • 低效率标记(low-efficiency maker):转化中一些标记的校 正切除总是倾向于发生在供体单链上,因而出现很低的转 化频率,这类标记称为~。
的交换引起邻近区域交换的增加;
局部负干涉:有些噬菌体、细菌或真菌的某些局部位点
明显的出现负干涉的现象;
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