Zn，存在于
真核细胞
中
Mn-SOD: 原核细胞中，Mw40000,2个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞中，Mw80000，4个亚基，每个亚基1个Mn Fe-SOD: Mw38000，2个亚基，每个亚基含1个Fe，存在 于
原核细胞
中
• 金属辅基与酶活性关系 • Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与 催化活性无关;Cu与活性有关，对酶活力 是必需的 • Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的 • Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的
1.SOD的性质
• 稳定性 • 对热稳定：天然牛血SOD可75℃加热数 分钟，对热稳定性与溶液离子强度有关 • 对pH的稳定性：一般pH5.3~9.5较稳定， 猪血SOD在pH7.6～9较稳定。 • 吸收光谱
结构特点：金属酶
Cu、Zn-SOD: Mw32000，2个亚基，每个亚基含1个Cu，1个
【热变性】【离心】 【洗涤】 【匀浆】 【离心】 上清液 上清液 牛肝 65℃5min 生理盐水 pH7.8PBS （NH4）2SO4饱和度 45％、65％ 【分级盐析】【离心】 【溶解】 【透析】
沉淀
溶液
透析液
【柱层析】 DE-52
流出液
【超滤】 【冻干】
冻干粉
二、胃蛋白酶（Pepsin ）
• 胃蛋白酶：是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞 （gastricchiefcell）所分泌，功能是将食物中的蛋白质分 解为小的肽片段。 • 胃蛋白酶也是第一个从动物身上获得的酶。 • 自猪、牛、羊等胃粘膜提取的胃蛋白酶用作助消化药。常与 稀盐酸同时用于幼畜消化不良性腹泻和慢性萎缩性胃炎。 • 临床上主要用于因食蛋白过多，引起的消化不良及病后恢复 期消化机能减退等。
（2）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋 白溶 酶原是它唯一的天然蛋白质底物，它作用于 精氨酸－缬氨酸键使得纤溶酶原转为纤溶酶。
（3）尿激酶的pI为pH8-9.
2.生产工艺
(1)工艺路线： 男性尿液 10℃pH8.5 沉淀 洗涤 硅藻土吸附 pH5~5.5 酸化尿 上清尿液 酸化 洗脱
硅藻土吸附物
自溶，过滤 浓缩干燥
猪胃粘膜 H O, HCl 2
氯仿 自溶液 脱脂
上清液
成品
（2）工艺过程：
①自溶、过滤 在夹层锅内预先加水100L及盐酸，加热至50℃时， 加入200kg猪胃粘膜，快速搅拌使酸度均匀，保持 45~48℃,消化3~4小时。用纱布滤去未消化的组织蛋 白，收集滤液。 ②脱脂、去杂质 将滤液降温至30℃以下，静防24~48h，使杂质 沉淀除去，得到脱脂酶液。 ③浓缩干燥 取脱脂酶液，在40℃以下浓缩到原体积的1/4， 真空干燥，球磨，得到产品。
硅藻土柱
洗脱液
去热原，去色素 pH8.0 透析液
流出液 产品
CM－C柱
洗脱液
（2）工艺过程：
①收尿 收集男性尿
②沉淀处理 尿液冷至10℃以下，用NaOH调pH至8.5, 静置1h，虹吸上清液。用盐酸调至pH5.0~5.5。
③硅藻土吸附 处理好的尿液加入1%尿量的硅藻土，于 5C下搅拌吸附1h。 ④洗脱 硅藻土吸附物洗涤装柱，先用0.02%氨水加 0.1mol/L氯化钠洗脱，当洗脱液油清变混时开始收集
• 1、组成（结构）、性质
• 胃中惟一的一种蛋白水解酶。其最适pH值为1～2。
• 胃蛋白酶作用的主要部位是芳香族氨基酸或酸性氨 基酸的氨基所组成的肽键。 • 药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物， 含有胃蛋白酶，组织蛋白酶，胶原酶等，为粗制的 酶制剂。 • 性状：外观为淡黄色粉末
2、生产工艺 （1）工艺路线：
第三节、重要的酶类药物
三、超氧化物歧化酶 （Superoxide dismutase, SOD）
• 超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂， 作为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国已有 产品。由于SOD能专一性去除超氧阴离子自 由基，故引起国内外生化界和医药界的极大关 注。
• 目前临床上应用集中在自身免疫性疾病上如类 风湿关节炎，红斑性狼疮，皮肌炎等
2.生产工艺
分离纯化SOD常根据原料，种类和性 质的差异而有所不同。
（1）以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺
【收集】
新鲜牛血 离心 溶血液
红细胞
【洗涤】 2％NaCl
干净红细胞 沉淀液
【溶血】
H2 O,30min
【去血红蛋白】
乙醇，氯仿，离心
上清
【分级沉淀】 丙酮
【溶解】
H2O，离心
上清液
【柱层析】 【超滤】 SOD粗提液 浓缩液 浓缩 DEAE-SephadexA50 60～70℃，10min，离心 【热变性】 【洗脱】 【超滤】
三、尿激酶（Urokinase ）
• 尿激酶是一种碱性蛋白酶，由肾脏产生， 主要存 在于人和哺乳动物的尿中。人尿 平均含有5~6U/ml。
• 临床上，尿激酶已经广泛应用于治疗各 种新血栓形成或血栓梗塞疾病。
1.组成性质
（1）尿激酶有多种分子量形式，主要有31300、 54700两种。尿中的尿胃蛋白酶原在酸性条件下可 以激活生成尿胃蛋白酶，后者可以把分子量54700 的天然尿激酶降解为分子量为31300尿激酶。
• 4）柱层析、洗脱、超滤浓缩：将上述澄清液超 滤浓缩后小心加到已用2.5mmol/L，pH7.6磷 酸缓冲液平衡好的DEAE－sephadex A50柱上 吸附，并用pH7.6的2.5～50mmol/L的磷酸盐 缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD活性的洗 脱液。
• 5）冷冻干燥
（2）以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺
吸附柱
pH7.6的2.5～50mmol/L PBS
洗脱浓缩液
【冻干】
冻干粉
（2）工艺过程：
1）收集、浮选
取新鲜牛血，离心除去血浆。
2）溶血、去血红蛋白：干净红细胞加水溶血 30min， 然后加入0.25倍体积的乙醇和0.15倍体积的氯仿， 搅拌15min，离心去血红蛋白，收集上清液。 3）沉淀、热变性：将上述清液加入1.2～1.5倍体 积的丙酮，产生大量絮状的沉淀，离心得沉淀物。 再将沉淀物加适量水，离心去不溶物，上清液于 60～70℃热处理10分钟，离心去沉淀得浅绿色得 澄清液。
⑤除热源、去色素ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
⑥CM－C浓缩 ⑦透析除盐
四、L-天门冬酰胺酶 （L-asparaginase）