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promegaDNA组织提取试剂盒

PromegaDNA提取试剂盒的使用方法
一、使用前的准备工作
Proteinase k solution:用无核酸酶的水把蛋白酶K稀释成20mg/ml,按照自己的每次平均使用量分装,储存在-20℃,融化时要在冰上融化,反复冻融会降低Proteinase K的活性
消化液配制:在tube中混合下面各种反应物,使用前放在冰上。

Wizard SV Wash solution(洗脱液)的配制:按照瓶子标签上要求的量,添加95%的乙醇到Wizard sv solution 中,做上标记,室温保存。

PromegaDNA提取试剂盒的使用方法步骤(离心机法)
0、将Nuclease-Free Water 放在65℃的水浴锅中
1、剪取动物组织20mg,分成相同的2份,放在1.5ml的离心管中,
样品中决不能含有软骨组织,否则会阻塞柱子
2、每份样品中添加275ul先前准备的消化液,确保消化液能够完
全覆盖样品,如果不能覆盖,将样品再剪得小点
3、把样品放到55℃的水浴锅或加热块中孵育16-18小时(过夜),
蛋白酶K消化过夜后2000g离心,取上清液到1.5ml的离心管
中。

4、向样品中添加250ul的Wizard SV Lysis Buffer,漩涡混匀
5、处理后的产物尽快进行下面的操作,如果不能进行下面的操作,
应该把它放在-70℃下保存,使用时应该冻融或者放在55℃温
和解冻
6、将收集管做上标记,将柱子放在收集管上,把整个1.5ml离心
管内的溶解产物转移到柱子中。

13000g离心3分钟,目的是让
基因组吸附在柱子中,如果仍有残留液体,可以重新13000g
离心一分钟
7、倒掉收集管中的液体,把柱子重新放回收集管上
8、检查一下乙醇是否已经添加到Wizard SV Wash Solution中
9、每个样品中添加650ul的Wizard SV Wash Solution(真空抽
滤要加800ul),13000离心1分钟
10、去除溶液,将柱子重新放置在集合管中
11、重复9-10步3次,(一共需要洗4次)
12、洗剂结束后,清空收集管中的水13000g离心2分钟
13、去掉收集管,取相同数量的1.5ml的离心管做上标记,将柱子
将在 1.5ml的离心管上,添加250ul65℃的Nuclease-Free
Water 到柱子中,室温孵育2分钟,13000g离心1分钟(要溶液,勿扔)
14、再在柱子中添加250ul的Nuclease-Free water,室温孵育2
分钟,13000g离心1分钟
15、扔掉柱子,将收集的纯化的DNA储存在-20℃至-70℃。

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