分光光度法实验
邻二氮菲分光光度法测定铁(条件实验)
光度法测定试样中铁含量
一、要求目的
1．掌握分光光度计和吸量管的使用方法。

2．学习如何选择分光光度分析的实验条件。

3．掌握分光光度法测定铁的原理及方法。

4．通过本次实验，应掌握初步设计分光光度分析方法的步骤。

二、实验原理
在pH为2－9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲（phen）生成稳定的橘红色络合物Fe(Phen)32+: 其lgβ3=21.3,摩尔吸光系数ε508＝1.1×104L.mol-1cm-1。

当铁为＋3价时，可用盐酸羟还原：2Fe3＋＋2NH2OH•HCl＝2Fe2＋＋N2↑＋4H＋＋2H2O＋2Cl-
Cu2+,Co2+,Ni2+,Cd2+,Hg2+,Mn2+,Zn2+等离子也能与Phen生成稳定络合物，在少量情况下，不影响Fe2＋的测定，量大时可用EDTA掩蔽或预先分离。

吸光光度法的实验条件，如测量波长，溶液酸度，显色剂用量、显色时间、温度、溶剂以及共存离子干扰及其消除等，都是通过实验来确定的。

本实验在测定试样中铁含量之前，先做部分条件试验，以便初学者掌握确定实验条件的方法。

条件试验的简单方法是：变动某实验条件，固定其余条件，测得一系列吸光度值，绘制吸光度－某实验条件的曲线，根据曲线确定某实验条件的适宜值或适宜范围。

三、注意事项
1.使用721B或722型分光光度计，提前布置学生预习P147~154，在每台仪器前附上一张
“使用方法”，要求学生看后才操作。

另外，还要预习P128~131中吸量管的使用方法。

2.一般两位学生共用一台仪器，合作做实验，但实验报告各自写，提前通知学生自备坐标
纸。

两个实验作完后一起交报告。

暂不统一评分标准，由各组自行综合考虑，原则上条件试验应与预期基本相符，相对误差5%以内为合格。

3.用高级卫生纸作代用品擦干比色皿。

要求学生实验完毕洗净比色皿，并将比色皿浸泡在
HNO溶液的烧杯中。

盛有15%的
3
4.实验分为两个步骤：用两个单元时间完成
a)分光光度法测定铁的条件实验
b)邻二氮菲分光光度法测定微量铁
四、实验步骤
第一部分：邻二氮菲分光光度法测定铁的条件实验
1、本次实验使用1.00×10-3Fe3+mol·L溶液，实验第二部分才使用100μg/ml Fe3+溶液和含Fe3+水样，注意不要取错。

2、“显色时间”试验，1小时和2小时不一定做。

3、“邻二氮菲与铁的络合比测定”不做。

4、到下课时间可暂停试验，未完成部分留着和实验第二部分一起做。

5、填好本材料成绩统计表。

实验第二部分：邻二氮菲分光光度法测定微量铁
Fe 那一份）作参比溶液。

1.本实验以试剂空白（加0ml 3
2.最大吸收波长为510nm，学生最好使用实验第一部分用过的那台仪器，并采用自己测到
的最大吸收波长。

3.“试液含铁量的测定”可和“标准曲线的制作”一起做。

未知试液为10μg/ml，即10mg/L。

4.简单讲解实验测定结果图解处理。

5.填好本材料成绩统计表。

五、思考题
1. 本实验量取各种试剂时应分别采用何种量器较为合适？为什么？
要点：取Fe3+溶液时必须用吸量管，因为吸量管有刻度，是准确的量器，取不同体积时，不用频繁更换。

其它试剂也可采用吸量管，因为所取的体积较少，没有小体积的移液管。

2. 试对所做条件实验进行讨论并选择适宜的测量条件。

要点1、最大吸收波长在520nm，2、显色剂用量选择在1-2mL.3、显色的酸度控制在pH 4.5-8.78之间。

4、显色后放置时间10min以上。

3. 怎样用分光光度法测定水样中的全铁和亚铁的含量？
要点：第一，测全铁时先用盐酸羟胺还原3价铁为2价，控制pH值，显色后测定。

第二，测亚铁时不用还原，控制pH值，直接显色测定。

4. 制作标准曲线和进行其它条件实验时，加入试剂的顺序能否任意改变？为什么？
要点：不行。

因为，只有2价铁参与显色反应，加盐酸羟胺的目的是把试样中的3价铁还原为2价，所以要先加入盐酸羟胺。