、植物组织中糖含量的测定
一、实验材料：苹果、梨、黄瓜等各种水果
二、实验目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主
要原料和贮存物质。

不同栽培条件，不同成熟度可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

三、实验原理：
1.糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物。

糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区 620 nm 波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。

2. 酮糖在一定条件下和间苯二酚生成鲜红色物质，该物质在 480 nm 处有最大
吸收，该方法可用来测定蔗糖。

测定时先用碱与样品共热，破坏其中的还原性糖，然后用间苯二酚测定蔗糖中的果糖部分。

3. 果糖与间苯二酚、盐酸共热生成的红色络合物在480 nm处吸收峰最高。

四、试剂配置：
80 % 乙醇
2 M NaOH
30 % HCl：用36 %的浓HCl配置。

葡萄糖、蔗糖和果糖标准液（1mg/ml）：用蒸馏水配置。

蒽酮试剂：150 mg蒽酮溶于100 ml 稀硫酸(76 ml 浓硫酸加入到30 ml 水中)。

0.1 % 间苯二酚：0.1g间苯二酚溶于100 ml 95 %的乙醇，避光保存。

五、实验步骤
1、提取
取0.5 g 植物组织，于2 ml 80%的乙醇中研磨后，转入两个2 ml 离心管中，75℃温浴10 min，5000g离心5 min，收集上清于10ml离心管中。

沉淀用80 % 乙醇于75℃水浴重复抽提两次，合并上清液后，用80 % 的乙醇定容至10 ml。

提取液用于可溶性总糖、果糖与蔗糖含量的测定。

注：将苹果的提取液稀释一倍。

2、可溶性总糖
取10 µl上述乙醇提取液，加入90 ul 80 % 的乙醇，加入3 ml 蒽酮试剂[150 mg 蒽酮溶于100 ml 稀硫酸(76 ml 浓硫酸加入到30 ml 水中)]，90℃保温15 min ，冷却后于620 nm处测吸光值。

含量以µg·g-1鲜重表示。

用20-100 µg 的葡萄糖同法测定，作标准曲线（体系中加入20-100μl葡萄糖，再用80 % 的乙醇补足剩余体积）。

3、蔗糖
取100 µl乙醇提取液，加入200 µl 2 M NaOH，100℃煮5 min，冷却后加入2 ml 30 %的HCl, 600 µl 0.1 % 的间苯二酚(0.1g间苯二酚溶于100 ml 95 %的乙醇)，80℃保温10 min，冷却后于480nm处测吸光值。

蔗糖含量以µg·g-1鲜重表示。

用20-100 µg 的蔗糖同法作标准曲线（体系中加入20-100μl蔗糖，再用80 % 的乙醇补足剩余体积）。

4、果糖含量测定
取10 µl乙醇提取液，加入190 µl 80 % 的乙醇、400 µl 0.1 % 的间苯二酚和2400µl 30 %的HCl ，80℃保温10 min，冷却后于480nm处测吸光值。

果糖含量以µg·g-1鲜重表示。

用20-100 µg 的果糖同法作标准曲线（体系中加入20-100μl果糖，80 % 的乙醇）。