碱性磷酸酶测定
一、试剂配制
1、甲苯
2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液：称取20g纯氯化铵，溶于
少量水（我配200ml，用一百多毫升水溶40g氯化铵），
然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml，用pH试纸测
pH，pH为10即可，不用刻意调pH。

（氨水很臭，需要带
口罩在通风橱配）
3、8%铁氰化钾溶液（只能用一周，放冰箱保存）：取8g铁氰
化钾，用水定容至100ml。

4、2%4-氨基安替比林（只能用一周，放冰箱保存）：取2g4-
氨基安替比林，用水定容至100ml。

5、0.5%磷酸苯二钠溶液（用pH9.4硼酸缓冲液配）
（1）先配制pH9.4硼酸盐缓冲液：称取4.768g硼砂（十
水合四硼酸钠）和0.44g纯氢氧化钠，用蒸馏水定容至
1000ml。

（硼砂需要用电炉加热配制，硼砂用称量纸称量，
氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH，pH试纸测为9）
（2）称取5.05g磷酸苯二钠，用pH9.4硼酸缓冲液定容
至1000ml。

6、酚标准溶液：
酚溶液：称取1g苯酚用水溶至1L，保存于暗色瓶中。

（苯酚还是需要水浴加热，详细配法看脲酶测定，但由于1g很难准确称量，
并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚，但测量后不影响标线的准确程度，R值为三个9）
酚工作液：取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL)
二、测定过程
1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶（每个样需要3个
重复，前两个重复和第三个重复分开放，第三个重复为
无基质重复，每天做两个无土样重复，此重复加甲苯、
磷酸苯二钠溶液），加5滴甲苯（用滴管加5滴），盖盖
盖子后用震荡机低速震荡15min（我选择160的速度），
然后给第三个重复加入20ml蒸馏水，给前两个重复加入
20ml磷酸苯二钠，盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒
温箱培养2小时。

2、培养结束后过滤，过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶（用
5ml枪加，由于过滤液体没那么多，每加一个样用两遍蒸
馏水润洗枪），加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢
氧化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾
溶液（用1ml枪加），每加一种都要充分摇匀。

立即显色，
立即定容。

3、标准液是吸取1,3,5,7,9,11,13ml氮的工作液，移至50ml容
量瓶，加水加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢氧
化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾溶
液。

（和第二条同步）
4、15min内在分光光度计于510nm处进行比色测定，以标准
液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。

（R
值为3个9以上）
三、结果。