A DNA
B RNA
C 蛋白质
D 脂类
名词解释：
1. Edman降解(Edman degradation) （苏州大学2008试题； 浙江大学2004试题） 2. 等电聚焦（isoelectrofocusing，IEF/EF） （苏州大学2008试
题；华南理工大学2005试题） 3. 蛋白质组学（proteomics） （深圳大学2010试题；武汉大学
（2）Trypsin是胰蛋白酶，是最常用的蛋白水解酶，专一性 强，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。用固 相法测序时，用胰蛋白酶裂解得到的肽段可以通过双功能 交联剂—对苯二异硫氰酸直接偶联到固相载体上。
解题思路
多注意常用酶的英文及缩写根据知识要点1、2，排除相互作用的方法。
2003试题） 4. 蛋白质组（proteome） （深圳大学2010试题；协和医科大学
2006试题；武汉大学2005试题） 5. 双向电泳（two-dimentionlal gel electrophoresis，2-DE）
（四川大学2006试题；军事医学科学院2000试题） 6. 酵母双杂交系统（yeast two-hybird system）（浙江大学2007
2. 简述双向电泳研究蛋白质组的优缺点。 （北京大学2010试题）
6. 请例举三种蛋白质分子量的测定方法，并 简述其原理。（中国海洋大学2003试题）
10.列出三种研究DNA和蛋白质相互作用的方法并 简要说明其原理。（中国科学院2010试题；兰州大
学2008试题）
答：（1）凝胶阻滞分析法（EMSA）：DNA在电场中发生 迁移，至一定位置形成条带，其迁移距离与其分子大小、 形状和所带电荷有关。DNA和蛋白质结合后其大小和形状 发生变化，因而其在电泳时迁移的距离也会发生变化，形 成不同的条带；（2）DNaseⅠ印迹法：DNA与蛋白质结 合后，结合部位的DNA因受到蛋白质的保护而不被 DNaseⅠ降解，而未与蛋白质结合的部位则对DNaseⅠ敏 感；（3）酵母单杂交：首先将已知的特定顺式作用元件 构建到最基本启动子的上游，把报告基因连接到最基本启 动子下游，然后将编码待测转录因子cDNA与已知酵母转 录激活结构域融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如 果能够与顺式元件相结合，就能激活最基本启动子，使报 告基因表达；（4）染色质免疫共沉淀（ChIP）它的基本 原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其 随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免 疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA片段，通过对目的片段的纯化与检测，从而获得蛋白 质与DNA相互作用的信息。
1. 生物质谱所用的内肽酶是 。（北京大学2010试题；北 京大学2009试题）
A CPA
B CPB
C CPY
D Trypsin
知识要点
（1）CPA，CPB，CPY是羧肽酶A、羧肽酶B、羧肽酶Y。 羧肽酶（carboxypeptidase）是一类肽链外切酶，它能 专一地从肽链的C-末端开始逐个降解，释放出游离氨基酸， 用于C-末端氨基酸残基分析。
A Northern blot
B Western blot
C Southern blot
D Eastern blot
10. 用来研究蛋白质-蛋白质间相互作用的实验技术是（ ）。 （中国科学院2007试题）
A 酵母双杂交技术
B 原位杂交技术
C RACE技术
D SAGE 技术
25. 免疫沉淀法（immunoprecipitation）一般用于分离 （ ）。（中山大学2008试题）
试题；协和医科大学2006试题） 7. SDS电泳（SDS-PAGE） （中国农业大学2006试题；南开大
学2006试题） 8. 蛋白质印迹法（Western blotting） （南开大学2006试题） 9. 蛋白质测序 （protein sequencing） （军事医学科学院2000
试题）
10. 免疫沉淀（immunoprecipitation，IP） （浙江大学2008试题）
13.酵母双杂交技术是利用其什么特点建立起来的？ 在科学研究中有什么作用？（武汉大学2008试题）
参考答案
（1）酵母双杂交系统（yeast two-hybird system）：是利 用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白-蛋白的相互 作用。真核生物转录因子具有DNA结合结构域（BD）和转 录激活结构域（AD）,这两个结构域分开时仍分别具有功能， 但不能激活转录，只有它们以适当途径在空间上较为接近时， 才能重新具有转录因子活性，并激活报道基因表达。
8. 研究蛋白质相互作用可以采用 、 、 等方法。 （北京大学2008试题）
14. 蛋白质双向电泳（2-DE）是根据蛋白质分子量大小和 的不同来分离蛋白质的技术。（中山大学2007试题）
5. 蛋白质芯片技术基本上是基于（ ）方法中的原理。（深 圳大学2009试题；中科院上海生命科学研究所2006试题）
（2）免疫共沉淀（IP）：基本原理是抗原和抗体之间专一性 地相互作用而沉淀，从而保留下来，其是一种经典的检测蛋 白质相互作用的方法。其实验过程比较简单，裂解细胞后， 加入抗体，抗原被沉淀下来后洗涤，去除非特异性结合，再 分析复合体。抗体可以是单克隆，也可以使多克隆。
（3）蛋白质芯片（protein chip）：蛋白质芯片可以用来大 规模筛选蛋白质之间的相互作用，将一个蛋白质芯片与荧光 标记的探针蛋白孵育，洗脱非特异性结合的蛋白后，可以通 过扫描芯片上的荧光点来检测稳定的相互作用蛋白点。
（北京大学2010试题；中国科学院2009试题）
知识要点 （1）蛋白质-蛋白质相互作用的研究已被纳入蛋白质组学的
研究范畴。 （2）蛋白质相互作用的方法包括：酵母双杂交、Far
Western印迹技术、GST融合蛋白质沉降技术、蛋白质芯 片技术、等离子表面共振技术、免疫共沉淀技术和荧光共 振能量转移法等。 解题思路 首先要了解蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质-DNA相互作 用方法的区别，然后根据知识要点选取2-3种方法进行阐 述。