精氨酸 Arg （R）10.76 天冬氨酸 Asp（D） 2.98 谷氨酸 Glu （E） 3.22 甘氨酸 Gly （G） 5.97 亮氨酸 Leu （L） 5.98 蛋氨酸 Met （M）5.75 脯氨酸 Pro （P）6.30 苏氨酸 Thr （T）6.53 酪氨酸 Tyr （Y）5.65 异亮氨酸 Ile （I）6.02
日立 L-8900 氨基酸自动分析仪
内容
氨基酸相关内容介绍 氨基酸分析仪发展及生产厂家 氨基酸分析仪原理及相应部件 样品的制备 应用 常见故障的分析与处理 保养
一 氨基酸相关内容介绍
氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通 称。是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养 所需蛋白质的基本物质。
离子交换树脂
专用氨基酸分析仪的色谱柱主要是以磺酸型强酸性阳离子交换 树脂为柱填料。强酸型阳离子交换树脂，它是由苯乙烯和二乙 烯苯聚合而成的。该树脂是由苯乙烯和二乙烯基本聚合后磺化 而成，球状树脂的粒度一般在5-10μm之间，交联度多为8%12%。
交联度大，树脂的网状结构紧密，孔隙度小，对外界离子进入 树脂有阻碍作用，较大的离子根本不能进入树脂内部，这样就 可以提高树脂对离子的选择性。交联度大的适合用于分子量较 小的氨基酸分离；交联度小，树脂结构疏松，孔隙度大，适合 用于蛋白质、肽类的分离。
氨基酸的化学性质
氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它们都能产生氨基与 羧基的一般反应，如脂化、甲基化、乙酰化以及酸碱的中和 作用等。有些氨基酸由于存在其它基团而产生特殊反应，如 半胱氨酸的巯基（-SH）
茚三酮反应
茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮 反应，生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成 正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。
4.提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱 上洗脱下来，洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。
5.氨基酸标准溶液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺序一定， 标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定，由此可计算出样品中 各种氨基酸的含量。
通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸 分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸 锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较 快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢， 基线一般不如钠盐系统好。
含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物 氨基连在α-碳上的为α-氨基酸 组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸
组成蛋白质的 20 种氨基酸除甘氨酸外，都有一个不对称碳原子，即α-碳原子。 α-碳原子有四个不同取代基：羧基、氨基、氢原子和 R 基团，不同氨基酸的 R 基团不同。 每种氨基酸有 D -构型和 L -构型，天然蛋白质中的氨基酸都是 L- 构型。 广泛存在于食品、药品、水产品、饲料和体液（血液、尿样）
氨基酸在溶液中受溶液 pH 的影响存在着下列平衡
等电点（pI）：在某一 pH 的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴 离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液 的pH成为该氨基酸的等电点。
不同氨基酸等电点
丙氨酸 Ala （A）6.02 天冬酰胺 Asn （N）5.41 半胱酰酸 Cys （C）5.02 谷氨酰胺 Gln （O）5.65 组氨酸 His （H）7.58 赖氨酸 Lys （K）9.74 苯丙氨酸 Phe （F）5.48 丝氨酸 Ser（S）5.68 958年 stein 与moore 两人先后独立发明离子交换分离、茚三 酮柱后衍生氨基酸自动分析仪。基于阳离子交换柱分离、柱后 茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）， 1972年 stein 与moore 两人同获诺贝尔奖。 IEC是当今国际标准和国 家标准以及仲裁和涉外的方法 。
氨基酸的分离分析
特殊沉淀法 离子交换法 萃取法 毛细电渗析
离子交换法分离分析氨基酸的原理
根据氨基酸是两性电解质这一特性，以及目的氨基酸与 杂质氨基酸 pK、pI 值的差异，利用离子交换树脂对各 种氨基酸吸附能力的不同进行分离纯化。
二 氨基酸分析仪发展及生产厂家
氨基酸分析仪进入国内市场已有近三十年的历史，它是专用于 测定蛋白质水解液（水解氨基酸）及生理体液中（游离氨基酸） 混合氨基酸含量的一种专用仪器，现已广泛应用于各行各业。 它与其他分析仪器区别在于只能检测氨基酸，不能作为他用， 具有专一性。
氨基酸分析仪洗脱过程
1. 氨基酸在pH 2.2的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附， 但结合强度各不相同。
2. 随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断的被吸附、解吸附。由于 氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小），吸附强度有差异。
3. 不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸＞芳香族氨基酸 ＞中性氨基酸＞酸性氨基酸及羟基氨基酸。
氨基酸分析仪生产厂家及常见型号
日立氨基酸分析仪发展历史
三 氨基酸分析仪原理及相应部件
氨基酸分析仪基本分析原理：
各种蛋白质是由20种氨基酸首尾相连，并以一定的顺序组成肽链。用 水解的方法将肽链打开，形成单一的氨基酸进行分析。所有的氨基酸 在低pH值的条件下都带有正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但 吸附的程度不同，碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中 性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。按照氨基酸分析仪设定的洗脱程 序，用不同离子强度、pH值的缓冲液依次将氨基酸按吸附力的不同洗 脱下来（先酸性氨基酸再中性氨基酸最后碱性氨基酸），被洗脱下来 的氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应（135度），生成可在分 光光度计中570nm和440nm检测到的蓝紫色物质（仲氨生成浅黄色物 质440nm检测），外标法定量。