实验步骤
2)纯度检查含量测定及鉴别
沉淀的离心管中加入蒸馏水2mLeabharlann 。振摇至沉淀溶解， 得DNA溶液；
取1ml核酸提取液，置50ml容量瓶中，用纯化水定容， 摇匀。测定260、280nm吸光度，计算A260/A280。 剩余1ml，加入二苯胺试剂1ml，摇匀，于沸水浴中加 热25分钟后，观察颜色之变化
实验4 动物组织中DNA的提取
1、任务背景
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA。由于 DNA分子在生物体内的分布及浓度不同，要选择适当的材料提取DNA。动植物中小牛胸 腺、动物肝脏、脾脏、鱼类精子、植物种子的胚中都含有丰富的DNA。微生物中，谷氨 酸菌体含7%～10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠杆菌9%～10%。 从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。对于低等生物，如从病 毒中提取DNA比较容易，多数病毒DNA相对分子量较小，提取时易保持其结构完整性。 从细菌及高等动植物中提取DNA难度大些。细菌DNA相对分子质量较大，一般达 2×109Da。因此易被机械张力剪短。细菌DNA，除核DNA外，还有质粒DNA等 2、任务目标 学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 3、工作原理 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将两者分离，常用的方法是用1mol/L氯化钠 提取抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使之乳化，再离心除去蛋 白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积 95%乙醇可将ＤNA钠盐分离出来。也可用0.15MNaCl液反复洗涤细胞破碎液除去RNP， 再以1mol/L NaCl提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿-异戊醇法除去蛋白。两种方法比较，后 种方法使核酸降解可能少一些。以稀盐溶液提取DNA时，加入适量去污剂，如SDS可有 助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中DNase对DNA的降解作用，在氯 化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的络合剂。通常用1.5mol/L NaCl，0.015mol/L 柠檬酸钠，并称为SSC溶液，提取DNA。
实验步骤
1）DNA提取 取新鲜动物肝，称取1g，切成小块，置10ml离心管中，加入4ml 0.14mol ／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液，用匀浆机匀浆，以4000r／min的转速离 心 10min，倒掉上清；用4ml 0.14mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液洗 涤一次。 在上述沉淀物中加入0.14mol／L NaCl－0.1mol／L EDTA溶液，使总体积 为 2mL，然后在60℃下，滴加 20％SDS溶液2－3滴，边加边摇动，再摇动 10min，使核酸与蛋白质分离。 加固体氯化钠0.2g混匀，使其最终浓度达到l.4mol／L，水浴30min。 加等体积的氯仿一异戊醇，混匀，摇动5min以4000r／min的转速离心 10min。离心管内的物质分为三层，上层为含DNA的水相层，下层为氯仿 一异成醇混合物，中间层为变性蛋白凝胶。 吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预冷），产生沉淀。 再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去上清液 (沉淀用80％乙醇溶液 离心洗涤)。