真菌临床检验技术
真菌临床检验在诊断和治疗真菌疾病中扮演着至关重要的角色。
由于真菌感
染菌种构成的变化，新的条件致病真菌的出现，以及真菌感染率的提高，我们需
要更为精细和深入的检测工作，以便确定真菌种类和其对抗真菌药物的耐药性。
对真菌进行精确的识别和耐药性分析，可以为临床治疗提供重要依据，从而有助
于患者的快速恢复。
这里就带大家一起来了解常见的真菌临床检验技术。
1.标本采集
标本采集是检验的基础，需根据病人的具体情况和疾病种类，选择合适的采
集方法。
如果疑似浅表真菌感染，例如体癣，可刮取病变部位的边缘痂皮。
对于
疑似深部真菌感染，需要采集的标本包括脓液、痰液、脑脊液、血液等。
无论何
种情况，标本的采集都需要在尚未使用药物治疗前完成。
如果已经用药，需要停
药一周后才能再次采集标本。
另外，标本的采集必须足量，一般情况下，活体组
织需要两份（一份用于显微检查和培养，一份送给病理科进行检查），皮屑需要
两块，胸腔液为20毫升，脑脊液和血液为5毫升。
在操作过程中，需要保证无菌，避免二次感染。
采集完成后的标本要尽快送检，保存时间不超过两小时，特
别是对于深部真菌标本。
2.直接检查法
真菌直接检验主要在显微镜下进行。
首先，取一部分患者的标本，放置在玻
璃载片上，加入适量的载液。
在平均分布标本后，用另一块玻片覆盖。
待片刻，
利用火焰迅速烘烤载玻片，但不可持续加热以避免结晶。
随后，轻压盖玻片，除
去气泡的同时使标本尽可能压薄。
清理周围的溢液后，可以用显微镜观察。
初步
选择低倍镜，观察是否存在孢子或菌丝。
确定存在后，使用高倍镜进行细致观察，描绘出孢子和菌丝的排列、大小、位置、特征和形态等。
真菌直接检查是一种较为快速和直接的检测方法，其结果可以明确患者是否
被真菌感染。
如果结果为阳性，可以确诊患者的真菌感染；如果结果为阴性，仍
不能排除真菌感染的可能性。
通过显微镜，我们可以明确部分病原菌种，如花斑
癣菌、新型隐球菌等，也能够确定某些特定的菌属，如念珠菌属。
此外，我们还
可以观察到真菌的形态，了解其在组织中的存在状态。
这些信息都对诊断和治疗
有重要的指导意义。
3.真菌培养法
真菌培养是为了鉴定和分离感染的真菌种类。
首先，选取适当的脱水培养基，加入适量的蒸馏水，摇动制成混悬液。
之后，缓慢加热，煮沸一分钟，准备进行
高温灭菌。
在灭菌前后分别分装到试管和平皿中，待其降至45-50℃时，完成分装，并附上标签。
然后，将培养基放置于室温下24小时，后置于4℃的冰箱中保存。
接种标本后，可以通过显微镜或者涂片观察孢子和菌丝的生长状态。
真菌培养的主要目的是从采集的标本中分离出病原菌，以明确是否存在真菌
感染，并进一步确定感染的真菌种类。
这样的方法能够有效地弥补直接检查所存
在的不足，如检查范围受限、分辨率不高等。
通过真菌培养，我们可以从显微镜
下观察到真菌的形态、结构和特征等详细信息，进一步对真菌的生理和生物特性
有全面的了解，这些都将对临床治疗有重要的指导作用。
此外，成功培养出的菌
种还能够为其他研究提供材料，如对真菌的基因学、生理学研究等。
4.分子生物学检测
分子生物学检测是一种较新的检测技术，主要包括PCR（聚合酶链反应）、
实时定量PCR、序列分析、T2MR（T2磁共振）等。
其中，PCR和实时定量PCR是
最常用的两种方法，通过对特定的真菌DNA进行扩增和定量，可以高度敏感和特
异地检测和鉴定真菌。
此外，通过对扩增的DNA进行序列分析，可以确切地鉴定
真菌的种类，甚至是亚种。
这些方法的优点是敏感性和特异性高，而且结果快速（通常几小时内可以得到结果），因此在临床上有很大的应用价值。
然而，由于
这些方法需要专门的设备和技术，而且操作步骤比较复杂，因此在一些基层医院
和疾病预防控制中心的应用还比较有限。
5.其他
此外，还有一些其他的检测技术，如抗原和抗体检测、MALDI-TOF MS（基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱）等，也在某些情况下被用来进行真菌的检测和鉴定。
抗原检测主要通过检测血液或者体液中的特定真菌抗原（如酵母菌的鞭毛蛋白或者曲霉的岩藻多糖等）来诊断真菌感染。
这种方法的优点是结果快速（通常几小时内可以得到结果），而且可以动态地监测疾病的进程。
然而，由于许多真菌抗原在体内的存在时间较短，而且可能受到交叉反应的影响，因此其敏感性和特异性并不理想。
抗体检测则是通过检测血液中的特定真菌抗体（如抗真菌IgG或者IgM抗体等）来诊断真菌感染。
这种方法的优点是可以检测到体内的早期感染和慢性感染，而且对于某些难以培养的真菌（如某些真菌性脑膜炎病原菌等），其检出率比培养和直接检查要高。
然而，抗体检测也存在一些问题，如抗体滴度的变化可能受到许多因素的影响，而且对于免疫抑制的患者，其检出率可能会降低。
真菌临床检验方法是真菌病诊断的重要手段，每一个步骤都需要精确操作，才能确保准确的检验结果，为患者的诊断和治疗提供有力依据。
然而，这些方法也有局限性，比如标本的采集和保存等都需要特别注意，以免影响到检测结果。
因此，真菌临床检验不仅需要技术精湛的实验人员，更需要对病原生物学有深入理解的临床医生，才能确保检验结果的准确性和应用性。