平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
化疗(n=48) 67.60 27.40 28.20 0.82 13.20 7.40 5.80
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 5.90 8.10 6.90
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 9.10 6.30 7.70
p值
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.031 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
手术、化疗和放疗对肺癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
手术 (n=152) 67.57 34.39 31.09 1.25 16.08 6.42 8.64
化疗(n=244) 67.67 33.78 32.07 1.30 16.27 7.48 7.93
放疗(n=164) 65.64 28.59 32.99 1.13 17.98 5.85 6.58
p值
0.093 0.001 0.021 0.011 0.045 0.029 0.430
* t检验：P<0.05 显著性差异
2、流式专业讲座：流式相关免疫学、流式相关血 液学、流式相关其他实验。
3、临床流式疑难病例解答：临床在职流式专家为 您解决临床检测中遇到的疑难病例问题，帮您更好 的做出诊断。
4、交流平台：丰富的交流平台可以让更多的流式 从业者在此交流心得，互相帮助，获得更多有用的 信息。
谢谢！
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 15.90 8.10 6.90
p值*
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.041 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
病例：
1、邢某，男，左上肺癌 2010年1月15日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 51% 20% 26% 12%
流式测淋巴细胞亚群在 临床中的应用
流式细胞仪的基本原理、特点、及应用 范围
常规淋巴细胞亚群检测的检测方法、临 床意义及具体应用
流式细胞仪检测原理
什么是 FCM ？
流式细胞术：利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或 生物颗粒进行多参数、快速的定量分析及分选的技术
细胞荧光化学技术+单克隆抗体技术+激光技术+流体 力学+光电测量技术+计算机技术
自身免疫疾病
SLE、类风湿关节炎、自身免疫性肝炎等 患者CD4+/CD8+比值异常，当治疗药物 有效时可恢复正常。
造血干细胞移植后重建
干细胞移植后免疫系统将重建，但是极为缓慢。 NK细胞首先开始升高，随后T、B淋巴细胞开始恢 复。CD4+比CD8+重建更晚，倒置CD4+/CD8+ 两年才能逆转。
FCM的特点
测量速度快：最快可在1秒种内检测上万个细胞 可进行多参数测量：可以对同一个细胞做有关物理、化学
特性的多参数测量 具有明显的统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 高分辨率(CV<2%)、高灵敏度(荧光检测灵敏度
≤100MESF，前向角散射光检测灵敏度(0.2∼0.5um) 既是细胞分析技术，又是精确的分选技术，分选纯度可达
检测方法： 1、按标本制备方法：LW;LNW
2、按分析方式： （阈值的设定） FSC/SSC;CD45/SSC;CD3/SSC等
3、绝对计数：需用绝对计数管
检测流程：
1、标本的留取及保存：抗凝情况，标本质量，保 存条件
2、荧光抗体标记：抗体选择，标记的时间、条件及 注意事项（如果做绝对计数有特别注意事项）
LSRII
FACSVantage
FACSCount
常用荧光素激发、发射、光源波长以及适用机型
IVD:体外临床诊断试剂
RUO:科研用试剂
以上两类抗体均有多种荧光标记可供实验的组 合搭配，除单色试剂外，还有多色组合试剂，便于 实验操作。
免疫学方面
淋巴细胞亚群及细胞活化分析、免疫功能监测、
HLA-B27的检测等
移植后免疫监测
免疫抑制剂治疗监测，了解机体的免疫状 态、用药剂量是否过多或不足及预防、抑制 排斥反应的发生。
实体肿瘤疗效观察
恶性肿瘤治疗前CD3+细胞数量、CD4+/CD8+ 细胞比值降低，化疗或放疗有效时则可逐渐恢复 或达到正常水平。
肺癌患者T淋巴细胞亚群变化
化疗、放疗及手术对食管癌患者淋巴细胞亚群的影响
手术、化疗和放疗对贲门癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值 CD3＋ CD4＋ CD8＋ CD4＋/8+ CD56＋ CD127＋ CD19＋
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 19.10 6.30 7.70
化疗(n=58) 67.60 27.40 38.20 0.82 13.20 7.40 5.80
99%以上
流式细胞仪的检测范围
细胞结构 细胞大小 细胞颗粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量
细胞功能 细胞表面/胞浆/核的特 异性抗原 细胞活性 细胞内细胞因子 酶活性 激素结合位点 细胞受体
流式细胞仪
FACSCalibur
FACSCanto
FACSAria
CD4+T细胞：下降 CD8+T细胞：HIV感染早期增高，发展为AIDS时下降 NK细胞：降低，特别是疾病晚期
SARS
淋巴细胞数量减低，部分患者表现出与AIDS和部 分晚期肿瘤患者相似的免疫功能状态。
研究发现： SARS患者淋巴细胞及其各亚群均受到破坏，以T 细胞受损为主，而且CD4细胞比CD8细胞受损更为 严重。 治疗后病情好转或治愈后，T淋巴细胞数量可逐 渐恢复正常。
NK 23%
3、曹某，男，胃癌 2010年3月24日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 43% 30% 15% 4%
NK 29%
2010年4月23日治疗后检测： CD3 CD4 CD8 B 53% 35% 21% 4%
NK 31%
3、唐某，男，慢淋
2010年8月25日入院检测：
CD3 CD4 CD8 B
3、红细胞裂解：裂解液工作液的种类决定使用方法 、作用时间及注意事项（特殊标本请特殊处理）
4、红细胞裂解液的去除，及上机前的其它注意事项
CD45/SSC 与FSC/SSC 的比较
双 色 淋 巴 细 胞 亚 群 检 测 分 析
三 色 淋 巴 细 胞 亚 群 检 测 分 析
四 色 淋 巴 细 胞 亚 群 检 测 分 析
三 色 淋 巴 细 胞 亚 群 绝 对 计 数
四 色 淋 巴 细 胞 亚 群 绝 对 计 数
临床意义
1、了解淋巴细胞的分化、功能，鉴别新的淋巴细胞亚群有重要 价值；
2、辅助诊断某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、 血液病、变态反应性疾病等)，分析发病机制，观察疗效及监 测预后有重要意义。
三色和四色试剂可用于 检测淋巴细胞亚群的绝对计数
原理：绝对计数管（TruCOUNT管）内含已知总数的荧光微球 Beads作标准内参，加入一定体积的血液和荧光素标记的单 克隆抗体，定量分析淋巴细胞中各群细胞的绝对值。
临床意义： 对于治疗前后免疫细胞变化、原发性免疫缺陷病、AIDS、 SARS、自身免疫病的诊断和治疗有重要意义。
NK 21%
2010年3月22日出院检测： CD3 CD4 CD8 B 55% 27% 24% 11%
NK 18%
2、马某，男，非何杰金淋巴瘤 2010年3月10日入院检测： CD3 CD4 CD8 B 57% 13% 42% 0%
NK 24%
2010年3月24日治疗后检测： CD3 CD4 CD8 B 65% 15% 50% 0%
NK
17% 6% 9% 79% 4%
2010年9月21日治疗后检测：
CD3 CD4 CD8 B
NK
53% 17% 34% 36% 9%
2010年10月25日治疗后监测：
CD3 CD4 CD8 B
NK
80% 14% 60% 13% 10%
1、常用流式细胞仪的应用： BD FACSAria、BD FACSCalibur、 BD FACSCount、BD FACSCanto、BD Influx等等。
主要检测项目：
总T、B细胞 判断免疫缺陷和自身免疫性疾病
Th和Ts细胞 检测免疫缺陷病（如SCID、AIDS患者）、自身免疫性疾病（如
SLE、急性GVHD和移植排斥患者） Th/Ts
升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、SLE） 降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血 NK细胞
介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用 活化淋巴细胞分析
血液学方面
白血病和淋巴瘤的免疫分型、造血干细胞计数、PNH诊断、 PLT功能、网织红细胞和网织血小板计数等
肿瘤病理学方面
肿瘤组织或脱落细胞的增殖周期和DNA倍体分析、肿瘤细 胞和白细胞的多药耐药性检查、肿瘤细胞表面标记及癌基因 产物分析等。
淋巴细胞亚群检测的检测方法
淋巴细胞：
T淋巴细胞：特异性细胞免疫应答 B淋巴细胞：特异性体液免疫应答 NK细胞：自然杀伤细胞，固有免疫
3、流式检验技术的不断进步，使淋巴细胞表性分析已成为临床 实验室的常规检查项目。
免疫缺陷病
原发性免疫缺陷病：患者血液淋巴细胞免疫表型可出现多种异常。如严重联 合免疫缺陷病（SCID）时，T淋巴细胞缺乏；X连锁无丙种球蛋白血症， B淋巴细胞数量缺乏或减少。