吸附量的测定① ——动态吸附法:
• 将等量已预处理的树脂适量，装入树脂吸附柱中，药液以 一定的流速通过树脂床，测定流出液的药物浓度，直至达 到吸附平衡。 • 计算树脂的比上柱量 (S)，然后用去离子水清洗树脂床中 未被吸附的非吸附性杂质，计算树脂的比吸附量(A)。 静态法较动态法简单，可控性强，但动态法更能真实反映实 际操作的情况。
先用水清洗以除去树脂表面或内部还残留的许多极性或水 溶性大的强极性杂质（多糖或无机盐）
然后用所选洗脱剂进行洗脱。一般是醇- 水系统，逐渐增 加醇的浓度。
对非极性MR：洗脱剂极性越小，洗脱能力越强 检测：洗脱的时候同时配合理化反应或薄层色谱检测，相 极性MR：极性较强的溶剂洗脱能力强 同者合并。
流速：流速过快，载样量少；分离效果差；速度慢，载样 量大，分离效果好，实验周期长。一般1.5BV/h为佳。
①用水除去水溶性杂质
②用有机溶剂除去脂溶性杂质
③再用吸附介质除去残留的其它溶剂，以免影响树脂
的吸附量
预处理的具体方法——方法1
乙醇，浸泡24h 充分溶胀 湿法装柱 乙醇清洗、检测 水洗、检测 准备上样
乙醇与水交替洗脱2-3次乙醇检测：洗至流
出液与等量水混合 洗脱剂用量为树脂体积的 2-3倍 不呈白色浑浊为止
忌：
1、树脂和水分几次加入 2、干柱
操作步骤③——上样
将样品溶于少量水中，须为澄清溶液。预先沉淀、滤
过处理，pH调节，使部分杂质在处理过程中除去，以
免堵塞树脂床或在洗脱中混入成品。
将柱中水放至接近柱床平面，将样品液以一定的流速
加到柱的上端进行吸附，一边从柱中放出原有溶剂。
注意控制流速。
操作步骤④——解吸（洗脱）
大孔吸附树脂（ Macroporous Resin ， MR ）是 20 世纪 60 年代发展起来的、 继离子交换树脂之后的一类新型分离材料，是一类没有可解离基团，具有多孔 • 性状：白色、乳白色至微黄色颗粒 • 粒度：20~60目。 • 稳定性：不溶于水、酸、碱及有机 溶剂，加热不溶，可在150℃以下使 用。 • 含水量：40~75%。
SV=1-5
SV=0.5-3 SV=1-5
3-4BV
3-4BV 3-4BV
必要时根据吸附液的PH值应用缓冲液
多次应用乙醇，丙酮，碱+乙醇等溶剂 碱再生后加入酸中和
七、大孔吸附树脂分离效果的影响因素
解吸剂种类 解吸剂pH 解析速度
MR的极性 MR的孔径 MR的比表面积 MR的强度
解吸剂性 质
大孔吸附 树脂
流速
流量
备
注
水洗脱
吸附 水洗 溶出
SV=1-5
SV=0.5-3 SV=1-5 SV=0.5-3
3-4BV
根据吸附量 0.5-1BV 2-10BV
必要时根据吸附剂的PH值使用缓冲液
应在吸附容量以下 将吸附液洗出
乙醇丙酮等的（含水）溶液溶出酸、碱、缓冲液 等 调节pH值或两者并用使有效成分溶出
水洗脱
再生 水洗脱
标组分，则从开始到此时所上样的药液体积总和就是 树脂在该吸附条件下对这一药物组分的泄漏点
吸附量的测定① ——静态吸附法:
• 准确称取经预处理的树脂适量，置适宜的具塞玻璃器皿 中，精密加入一定浓度的欲分离纯化的植物提取物的水 溶液适量，置恒温振荡器上振荡，震动速度一定，定时 测定药液中药物成分的浓度，直至吸附达到平衡。计算 吸附量Q. Q=(C0-Cr)· V/W Q为吸附量，C0为起始浓度，Cr为平衡浓度，V为溶液 体积，W为树脂质量
1.2 关于大孔
大孔吸附树脂是一种高分子聚合物，由聚合单体、交联 剂、致孔剂、分散剂等添加剂经聚合反应制备而成。 聚合物形成以后，致孔剂被去除，在树脂中留下了大大 小小、形态各异、互相贯通的孔穴。 孔形状是不规则的，将其看作近似圆形，其直径称为孔 径。一般所说的吸附树脂的孔径都是平均孔径。
引申
大孔吸附树脂的分类
吸附流速
• 流速过快时，树脂与被吸附物质分子间来不及充分接触， 致使分子不能充分扩散到树脂内表面，就随着上样液一 起泄露出去，所以造成了随着流速的增加，吸附量下降， 泄漏量增大的现象。
• 在实际生产操作中，从尽量缩短吸附时间和增大吸附量 的角度出发，应根据不同的吸附柱选择最佳的流速。一 般上样时控制流速在20mL/min为宜。
4、上样温度 3、溶剂浓度
浓度增加，吸附量增加，但不
能超过MR的吸附量 温度太高影响吸附，<50℃
5、吸附流速
20mL/min为宜
溶液pH
树脂对某种物质的吸附，特别是对生物碱和黄酮类物质的
吸附，很大程度上受它的解离程度的影响。
对非极性吸附树脂来讲，酸性物质在酸性条件下，以分子
形式存在，易被树脂吸附.
1、非极性MR：分子上不存在正负电荷相对集中
2、中等极性MR：存在酯基一类的基团
3、极性MR：存在酰胺基、亚砜、腈基等极性较大的基
团
4、强极性 MR：存在吡啶基、氨基、氮氧基团等强极性
基团
引申
1.3 关于吸附
吸附作用 化学吸附 物理吸附
内部分子之间的相互作用均等；表面分子有一面没有 受力；这部分分子存在吸引其他分子的剩余力，从而 产生吸附作用。 该吸附力可从溶液中吸附其他物质；被吸附的分子同 时受到吸附剂表面的吸附力和溶剂的脱吸附力；一段 时间之后，建立起吸附平衡。 比表面积=表面积/质量 单位m2/g 树脂颗粒的外表面积很小，一般在0.1 m2/g左右，但 内部孔洞的表面积很大，可达500-1000 m2/g ，这是树 脂良好吸附的基础。
注意：再生后树脂可反复进行使用，若停止
不用时间过长，可用大于 10% 的 NaCl 溶液
浸泡，以免细菌在树脂中繁殖。 一般纯化某一品种的树脂，当其吸附量下降 30%以上不宜再使用。
分离的工艺一般经验
工序
填充 逆流洗脱 前处理 SV=1-5 5-10BV 除去小粒子及破碎树脂 用（含水）乙醇等进行洗脱
两个重要的概念
比上柱量：达到吸附终点时，单位质量吸附树脂吸附夹带 成分的总和。 S=(M上-M残)/M
树脂易结块，柱子壁上有很多气泡，使得流
速越来越慢、到最后流速几乎为零，所以选
用柱子时不能选用太细的玻璃柱。
八、大孔吸附树脂分离工艺条件考察
1. 大孔树脂的泄漏（穿透）曲线与吸附容量的考察 2. 大孔树脂的解吸曲线与解吸率 3. 大孔树脂的再生 4. 树脂分离工艺的验证实验
① ② ③ ④ ⑤ 解吸率的测定 解吸剂种类的确定 解吸剂pH的确定 解吸速度的确定 解吸曲线的绘制
在碱性环境下，以离子形式存在，物质不易被吸附。
吸附液的浓度
• 对于一定量树脂，浓度太低，尽管吸附效率高，但是不 能完全发挥树脂的作用，浪费树脂且生产效率低； • 浓度太大，树脂的吸附容量增加，但同时泄漏较多，造 成了药液的浪费。 • 所以在生产过程中，为了提高生产效率且不造成浪费， 单柱吸附时，上柱液含生药量以在泄漏点附近为宜；若 多柱串联吸附上柱液含生药量以接近饱和点为宜。
乙醇溶解，滴加水到乙醇溶液中，溶液中无白色浑
浊现象。
预处理的具体方法——方法3
• 树脂与有机溶剂一起在水浴上回流，直到洗涤液
加水不显浑浊为止，最后用水洗掉所用有机溶剂， 备用。
操作步骤②——树脂的装柱
• 通常以水为溶剂湿法装柱 • 玻璃柱底部放少量的脱脂棉，厚度1-2cm • 树脂柱中加少量水，树脂中也加入少量水，搅拌均匀后 一次性倒入保持垂直的柱中，倾倒树脂的同时，打开柱 底部的阀门，让柱中水流出，树脂自然沉降。 • 最后在柱床顶部加一层脱脂棉。
八、 大孔吸附树脂分离技术
一、先提两个问题？
1、什么是大孔吸附树脂分离技术？
大孔吸附树脂吸附分离技术是以大孔吸附树脂为吸附剂，通过物理吸附从 中药及其复方提取液中有选择性地吸附其中的有效部分，去除无效部分的一种 提取纯化的新工艺，可以达到分离、富集中药有效部位或有效成分的目的。
2、什么是大孔吸附树脂？
水洗检测：无醇味 且水液澄清
最终以水洗脱
预处理的具体方法——方法2
• 乙醇浸泡24h→用乙醇洗至流出液与水1：5不浑浊→
用水洗至无醇味 → 5%HCl 通过树脂柱，浸泡 2-4 h→
水洗至中性 → 2%NaOH 通过树脂柱，浸泡 2-4 h→ 水
洗至中性，备用。
• 检查：取水洗脱液100ml，水浴蒸干后，加入1～2ml
2、被分离物质分子大小
根据物质大小选择适宜孔径的MR 一般来说，分子体积越大，疏水性增加，对非极性MR的吸附力越强
7.3 上样溶剂的性质对分离效果的影响
1、溶剂对被分离物质的溶 解度
成分在溶剂中溶解度大，在该 溶剂中，对MR吸附力小
2、溶剂pH
酸性化合物在酸性溶液中吸附 碱性化合物在碱性溶液中吸附 中性在近中性
•
7.4 解吸剂性质对分离效果的影响
1.解吸剂种类
非极性MR采用非 极性溶剂洗脱； 极性MR同理
2. 解吸剂的pH
弱酸性物质用碱 液洗脱；弱碱物 质采用酸液洗脱
3. 解吸速度
0.5-5mL/min 为 宜。
玻璃柱粗细
• 在分离、纯化过程中，玻璃柱子的粗细影响 此外，还有一点需要我们注意
分离结果，当柱子太细，有机溶剂洗脱时，
快写 笔记
三、吸附规律
遵从类似物质吸附类似物的“相似相容”原则
非极性MR宜于从极性溶剂中吸附非极性物质；
强极性MR宜于从非极性溶剂中吸附极性溶质；
中等极性 MR ，不但能从非极性溶液中吸附极性物质， 也能从极性溶液中吸附非极性物质。
四、分离规律
• 分子量相似的成分 – 极性越小，吸附能力越强，则越难洗脱下来； – 极性越大，吸附能力越弱，则越易洗脱下来。 • 极性相似的成分 – 分子量越大，越易洗脱下来。