牛肉膏蛋白胨液体培养基
菌种——
土壤颗粒
大肠杆菌
枯草杆菌
4 操作步骤
（1）取牛肉膏蛋白胨液体培养基四支，贴好标签，分别接种 土壤颗粒、大肠杆菌、枯草杆菌，余下一支不接种作为
空白对照，在每支试管口悬挂一条经无菌水湿润的红色
石蕊试纸，并加好试管塞。 （2）将已经接种的培养管置于28--30℃培养5--7日。
甲基红试验是用于检测分解葡萄糖产 生有机酸如甲酸、乙酸、乳酸等，当细菌 分解糖产酸时，培养基中的甲基红指示剂
由橘黄（pH6.3）变为红色（pH4.2），即
甲基红反应。
3 试验材料
培养基—— 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验）
菌种——
大肠杆菌
产气肠杆菌
4
（1）接种与培养
实验八
微生物生理生化特性检测
本次实验内容（4-5人1组） 一 糖发酵试验
二 好气菌的氨化作用试验
三 吲哚和甲基红试验
一 糖发酵试验
1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术
2 基本原理
2 基本原理
吲哚和甲基红试验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气ห้องสมุดไป่ตู้ 杆菌，多用于水细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但 在饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠 杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分 开。
吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某 些细菌可产生色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨 酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛 遇吲哚形成玫瑰吲哚（红色）。
一 糖发酵试验
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 供试糖 蔗糖
产气 产酸 产气
产酸、产气
注：记录生长情况用符号表示： —：不生长； +：生长差； ++：生长一般； +++：生长良好
二 好气菌的氨化作用
表2 好气菌的氨化作用试验结果
检测 项目
接种 菌样
土壤颗粒


操作步骤
将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支蛋白胨水培养 基（吲哚试验）。
将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支葡萄糖蛋白胨 水培养基（甲基红试验）。
37℃培养48小时。
（2） 结果观察
▲ 吲哚试验
在培养48h后的蛋白胨水培养基中加入3--4滴乙醚，摇动 数次静置1--3min，待乙醚上升后，沿试管徐徐加入2滴吲 哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。
▲ 甲基红试验 在培养48h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入甲基红试剂2 滴，培养基变红者为阳性，变黄者为阴性。（注意：甲基 红试剂加得过多，可出现假阳性现象。）
甲 基 红 试 验
大肠杆菌：+ 产气肠杆菌：-
阳性
阴性
对照
吲 哚 试 验
大肠杆菌：+
阳性
产气肠杆菌：-
伏 普 试 验
产气肠杆菌：+ 大肠杆菌：-
—
阳性
阴性
对照
表3 吲哚和甲基红试验结果 菌名 大肠杆菌 产气肠杆菌 空白对照 试验项目
吲哚试验 甲基红试验
试验结果记录（“+”表示阳性反应，“—”表示阴性反应）
实验报告
按实验内容分别书写。要求每个实验写出：
1 实验目的
2 实验原理
3 实验结果。
实验结果用表格形式给出，并对实验结果进行分析。 4 分析讨论
大肠杆菌
枯草杆菌
4 操作步骤
在试管外壁标明发酵培养基名称和接种细菌菌名。 取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草
杆菌，第三支不接做对照；
取蔗糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草杆 菌，第三支不接做对照。 将接种的和做对照的6支试管放置28~30℃培养2~3天。 观察各试管颜色变化及杜氏小管中是否有气泡。
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 供试糖 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 产气 产酸 产气 产酸、产气 蔗糖
注：记录生长情况用符号表示： —：不生长； +：生长差； ++：生长一般； +++：生长良好
二 好气氨化作用试验
1 目的要求 2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
枯草杆菌
大肠杆菌
空白对照
培养液 浑浊程度 红色石蕊试 纸变色程度
三
吲哚和甲基红试验
表3 吲哚和甲基红试验结果
菌名 大肠杆菌 产气肠杆菌 空白对照
试验项目
吲哚试验 甲基红试验
试验结果记录（“+”表示阳性反应，“—”表示阴性反应）
不同细菌对糖的分解利用能力存在较大 差异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的 生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机 酸和气体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，
可根据培养基特定的酸碱指示剂的特征性的
颜色变化检测；若产气，可从培养基中的杜
氏小管中是否有气泡观测。
3 试验材料
培养基—— 无菌葡萄糖发酵液体培养基 无菌蔗糖发酵液体培养基 菌种——
（3）结果检测：
观察各管红色石蕊试纸变色及培养液浑浊情况。
表2 好气菌的氨化作用试验结果
检测 项目 接种 菌样
土壤颗粒
大肠杆菌
枯草杆菌
空白对照
培养液 浑浊程度 红色石蕊试 纸变色程度
三 吲哚和甲基红试验
1 目的要求
2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
学习掌握吲哚和甲基红试验原理。 学习掌握吲哚和甲基红试验在肠道菌鉴定中的方 法及意义。
了解好气氨化作用的原理。 掌握通过氨化作用鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物的接种技术。
2 基本原理
不同微生物对含氮有机物分解能力及
代谢途径、最终产物不尽相同，这些特征
性生化反应可作为菌种鉴定的重要依据。
微生物可分解含氮有机物，最终产生氨气。
以酸碱指示剂试纸检测。
3 试验材料
培养基——