革兰氏染色及镜检：于上述平板上 长出的菌落中挑取1～2个大肠菌群可 疑菌落进行镜检和革兰氏染色
4. 复发酵试验：将上述镜检之菌 落同时接种于乳糖发酵管，置 于35 ℃ ～37℃培养24土2h，观察 产气情况。
四、结果报告（按照国标及有关标准）
凡是在乳糖胆盐发酵管产酸、产气，在指示性 培养基上能生长的，革兰氏染色为阴性的无芽抱杆 菌，在复发酵管中产酸、产气的，即说明有大肠菌 群的细菌存在—大肠菌群阳性； 有一项不符的，即说明无大肠菌群的细菌存 在—大肠菌群阴性。 根据有大肠杆菌细菌存在的初发酵管的管数， 查相应的大肠杆菌检索表，报告每100毫升待检样 品中大肠菌群细菌的最近似数。
实 验 八 大肠菌群最近似数的测定
大肠菌群:coliforms
最近似数:most probable number,MPN
概念：大肠菌群系指一群在37℃ 24h能
发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性
厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，
包括肠杆菌科的埃希氏菌属、柠
檬酸细菌属、克雷伯菌属、肠
杆菌属。
单位：MPN/100mL（g）
一、实验目的
1.掌握大肠菌群最近似数检验技术的
要点 2. 学会发酵法检验大肠菌群最近似数
二、实验器材
样品 37℃恒温培养箱、接种环、酒 精灯、试管架、记号笔等 培养基
三、方法 1、样品及其稀释（同细菌总数测定）
2、接种乳糖胆盐发酵管（3×3=9支） 3、鉴别培养（伊红美兰） 4、乳糖复发酵试验
1. 采样:无菌操作
2. 初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发 酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml 及lml以下接种量采用单料管。每一接种量接 种3管，置于35～37℃培养24士2h。将产酸、 产气的发酵管按下列程序继续进行检验。
3. 分离培养：将产气的发酵管中的发
酵液在EMB平板上划线分离，置于35 ～37C培养18 ～ 24h