超声波提取法对苦荞茶中芦丁提取量的实验研究
一、实验仪器和材料
超声波发生器（型号：生产厂家：）减压蒸馏装置（型号：生产厂家：）紫外分光光度计（型号：生产厂家：）恒温干燥器 100ml烧杯5个 50ml烧杯5个100ml容量瓶6个 25ml容量瓶6个电子天平
芦丁标准样苦荞样品500g（生产商：甘洛县彝家山寨农牧科技有限公司芦丁含量1.32% ）无水乙醇2000ml 亚硝酸钠100ml 硝酸铝100ml 氢氧化钠200ml（均为分析纯）蒸馏水
二、待测样品的制备
将苦荞在4O～45℃恒温干燥箱中干燥 4～5 h，粉碎，过250um筛。

称取1．000 g苦荞，用一定浓度乙醇浸泡3 h，超声波提取一定的时间，减压过滤，收集滤液至100 mL容量瓶并定容至100 mL，作供试液。

三、对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置100ml容量瓶中，用60%乙醇溶解定容至刻度，摇匀，即得。

四、线性关系的考察
精密量取对照品溶液0,1.0，2.0,3.0,4.0，5.0，6.0ml，置25ml容量瓶中，加蒸馏水至6ml，加5％亚硝酸钠1ml，摇匀，静置6分钟，加10％硝酸铝1ml，摇匀，静置6分钟，加4％氢氧化钠10ml，加蒸馏水至刻度，静置15分钟，用紫外分光光度计测定吸收度，检测波长510nm。

以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，求回归方程、相关系数r。

五、样品含量测定
准确吸取供试品液10．0mL于50 mL容量瓶中，按照芦丁标准曲线计算样品中的芦丁含量。

具体计算方式如下：
1．000 g苦荞中芦丁质量(mg)：
M=C(mg／mL)25 mLO．5lO0 mL
1.000g苦荞中芦丁提取率(％)：
W(%)=
六、单因素和正交试验
利用芦丁标准曲线方程进行定量评价，以原料的芦丁提取率作指标，分别考察乙醇浓度、超声时间、料液比对提取率的影响，并在单因素试验基础上采用正交试验法确定苦荞茶中芦丁的最佳提取工艺。

正交试验设计选择三因素三水平。

根据正交设计方法按L9(3 )进行试验，因素水平见表1。

表1 正交试验的因素水平
水平 A
乙醇浓度
/%
B
超声时间
/min
C
料液比（g/ml ）
1 50 10 1/30
2 60 20 1/40
3 70 30 1/50
正交试验
A 乙醇浓度%
B
超声时间/min
C料液
比
（g/ml）
实验指标
提取率（%）
1 50 10 1/30 1.681
2 50 20 1/40 1.873
3 50 30 1/50 1.843
4 60 10 1/50 1.616
5 60 20 1/30 1.760
6 60 30 1/40 1.918
7 70 10 1/40 1.387
8 70 20 1/50 1.647
9 70 30 1/30 1.669 T1 5.397 4.684 5.11
T2 5.294 5.28 5.178
T3 4.703 5.43 5.106
k1 1.799 1.561 1.703
k2 1.765 1.760 1.726
k3 1.568 1.810 1.702
R 0.231 0.249 0.024
优化条
A1B3C2
件
B>A>C
最佳条件为50%乙醇、超声时间30分、料液比1/40
提取率为 2.041%
回收率实验
用标准加入法测定紫外线检测的回收率，精确吸取样品溶液2ml。

分别加入
2,3,4,ml芦丁标准液后测定吸光度，由芦丁标准曲线的测定值得所需的回收率。

所得的平均回收率为
样品溶液/ml+芦丁标准品/ml 样品溶液中芦丁量/mg 加入标准液中芦丁量/mg 测定值回收率/% 平均回收率/% RSD%
2 + 2 71.704 40 103.22 92.4
2 +
3 71.70
4 60 128.1
5 97.3 94.3 2.83 2 + 4 71.704 80 141.34 93.2
,
精密度检测
对苦荞茶提取液平行测定6次，得6个吸光度，在标准曲线上对应6个浓度值，结果见表2.其SD值为0.002%，RSD值为0.188%，偏差值较小。

表2 芦丁测定的精密度结果
编号 1 2 3 4 5 6
吸光度 1.228 1.228 1.225 1.231 1.226 1.228
稳定性实验
取样品测定液，，每隔0.5h测定一次吸收度，测定结果见表3，结果表明从测定开始，2.5h内其吸收度基本稳定，平均值为1.222，RSD值为0.132%。

表3 芦丁测定的稳定性实验
时间/h 0 0.5 1 1.5 2.0 2.5
吸光度 1.222 1.224 1.221 1.220 1.224 1.222
浓度/（mg/ml）35.647 35.706 35.618 35.589 35.706 35.647。