植物组织中硝态氮含量的测定
目的意义根系吸收的无机态氮，有铵态氮和硝态氯。

植物体内硝态氮合量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。

叶菜类和根菜类中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害人体健康。

测定植物组织硝态氮含量对研究植物氮素营养和农产品安全性均有重要作用。

一、实验原理
本实验采用硝基水杨酸比色法测硝态氮，其原理是在有浓硫酸的条件下NO3-与水杨酸生成硝基水杨酸。

产物硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色，在410 nm处有最大吸收峰，在范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。

二、材料、设备和试剂
1.材料玉米、接骨木、瓜类、葡萄等植株幼苗。

2.设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、滤纸等。

3.试剂
（1）100mg/L硝态氮标准溶液精确称取烘干至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水（无离子水）中，定容至1000ml。

（2）5%水杨酸-硫酸溶液称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中（密度为1.84），搅拌溶解后，贮存于棕色瓶中，置冰箱保存1周有效。

（3）8%氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。

三、操作方法
1．标准曲线的制作
(1)吸取100 mg/L硝态氯标准溶液1m1、2ml、4m1、6m1、8ml、10ml、12m1分别放入10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，使之成为10、20、40、60、80、100、120µg /m1硝态氮的系列标准液。

(2)取8支试管，分别编号为0-7，以0号管加入0.1ml蒸馏水作空白，1-7号管分别吸取上述系列标准溶液0.1ml。

再分别加入0.4ml 5％水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8％NaOH溶液9.5ml，摇勾冷却至室温，以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度，以硝态氯含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

见下表。

2．样品制备称新鲜植物组织l-2g研成匀浆，(或称经70℃烘干磨碎过60目即孔径0.25mm筛的干样100mg)装入20m1具塞刻度试管，加无离子水10-20ml，盖紧塞子，置于45℃恒温水浴浸提1h，其间不断摇动，然后过滤或离心(如含色素需脱色)，滤液备用。

若样品是伤流液，则可直接测定。

3．硝态氮的漓定
吸取样品液0.1m1放入故人编号为8的试管中，其他操作同标准曲线，在标准曲线上可查得硝态氮含量。

表1 水杨酸比色法测硝态氮反应体系
项目管号
0 1 2 3 4 5 6 7 8
硝态氮系列浓度（µg/ml）0 10 20 40 60 80 100 120 样品
各浓度硝态氮用量（ml）水0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含硝态氮（µg）0 1 2 4 6 8 10 12 x 5%水杨酸-硫酸（ml）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 8%NaOH(ml) 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 吸光度值（A410）
四、实验结果
样品中硝态氮含量（µg/g）=m x×V/V1×W m x:标准曲线查出测定液中硝态氮含量（µg）
V:样品提取液总体积（ml）
V1:用于测定的样品液（ml）
W:样品鲜重或干重（g）。