取后各放入50-100ml的烧杯中，加蒸馏水约
50ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中，
转移到储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱。
配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液
10ml。
表2 MS培养基微量元素的称量及定容（50×） MnSO4.4H2O 22.3 1115 ZnSO4.7H2O 8.6 430 CuSO4.5H2O 0.025 1.25 H3BO3 6.2 310 Na2MoO4.2H2O 0.25 12.5 KI 0.83 41.5 CoCl2.6H2O 0.025 1.25
培养基配制
移母液 确定配方 称取蔗糖、琼脂 二次定容 定 容 培养基熬制 调pH值
接
种
灭
菌
扎
口
分
装
母液吸取量的计算
公式1：
配制培养基的升数 母液吸取量= 母液体积×———————— 母液浓缩倍数 公式2： 培养基要求的含量 母液吸取量= —————————— 母液每ml的含量
调pH值：
•ｐH影响培养基的硬度 ｐH ＞6.5 ｐH ＜5.0 培养基会变硬 培养基不易凝固
容于500ml重蒸馏水中。
表1 MS培养基大量元素的称量及定容（5×） KNO3 1900 9500 NH4NO3 1650 8250 KH2PO3 170 850 MgSO4.7H2O 370 1850 CaCl2.2H2O 440 2200 定容于500ml重蒸馏水中，最后加入 CaCl2.2H2O，每升培养基取此液100ml
表3 MS培养基铁盐母液的称量及定容（100×） FeSO4.7H2O Na2-EDTA.2H2O 27.8 37.3 2780 3730
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
此液5ml
4.有机物成分的配制
在MS培养基配方中，有机物成分有维生素 和氨基酸（表4），由于用量小，也应配成母 液。按培养基配方用量的50倍，用感量为 0.0001g的电子分析天平分别称取后放入 100ml的烧杯中，加重蒸馏水或蒸馏水约80 ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中， 转移到储液瓶中保存于4℃冰箱。配制培养基 时，每配制1000ml培养基取此液10ml。
实验二 培养基制备与灭菌
实验方法及步骤
1.培养基配制 每组配制培养基1000 ml。 (1)每组取烧杯一只，分别量取大量元素、微量元素、铁盐、有机物 质成分置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。 (2)每组取1000 ml白瓷缸一只，用量筒取1000 ml蒸馏水倒入白瓷 缸中。划好液位线，再将蒸馏水倒出一半。称琼脂5g左右倒入 白瓷缸中，再称蔗糖25g备用。将加入琼脂的白瓷缸放在电磁炉 上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂溶化后加入混合液，将装 有混合液的烧杯用蒸馏水洗三次，倒入白瓷缸中，并加入蔗糖加 热片刻（注意不要煮沸），关闭电磁炉，加蒸馏水定容至液位线。 (3)用1N NaOH或1N HCL将pH值调至5.8-6.3。调时应用玻璃棒不 断搅动，并用pH值试纸测试pH值 (4)用玻璃漏斗，将1000ml培养基分注于20个锥形瓶中，每只约 25 ml。 (5)用封口膜封好，写明培养基代号，扎好线绳。
数据处理
继代成活率 = 继代成活的植株数/接种试管苗 的总株数×100%
观察时间 继代成活的 植株数 第一次 第二次 第三次 ……
接种试管苗 的总株数 继代成活率
V 壮苗生根
内容要求 简述激素（特别是生长素与细胞分裂 素）之间的相互作用对分化（长芽或 生根）的影响及生根培养的意义 生根培养基的制备 培养过程中可能出现的问题预见 接种过程中的注意
植物组织培养实验实习
董雯 生物技术教研室
内容
1.实习实验
（1）培养基母液的配制（MS培养基）
（2）培养基制备与灭菌
（3）初代培养（外植体接种）
（4）继代培养
（5）生根培养
2.实习报告撰写
实验一 培养基母液的配制（MS培养基）
母液配制流程图 确定培养基 按照扩大倍 数称量 溶 解 按顺序混合
贴标签 保存于冰箱
母液分装
定 容
实验方法及步骤
1.大量元素母液的配制
MS培养基中大量元素共有5种（表1），按照
培养基配方的用量，把各种化合物扩大5倍，用
电子天平，分别用50ml烧杯称量。并在每只烧
杯中加入30－40ml重蒸馏水溶解。溶解时，可
置于酒精灯上略加热或电炉上加速其溶解（但
要注意温度不可过高）。然后混合按表1顺序定
总接种瓶数
污染率
数据处理
接种成活率 = 接种成活的植株数 / 接种外植体 的总株数×100%
观察时间 第一次 第二次 第三次 … …
15 20 25 15 20 25 处理时间 min min min min min min 接种成活 的植株数
接种外植体 的总株数 接种成活率
IV 不定芽继代增殖
其中：
萘乙酸（NAA） 6-BA 95％酒精或1 N NaOH 1 N HCl 或1 N NaOH
2.接种前的准备
培养基、接种工具等的灭菌
超净工作台通风开关30min，紫外照射 15min进行灭菌。 3.接种 用无菌的剪刀和镊子将材料进行适当 的剪切并接入培养基中，作好标记，放 入培养室中进行培养。
内容要求 简述激素（特别是生长素与细胞分裂 素）之间的相互作用对分化（长芽或 生根）的影响及继代增殖培养的意义
继代培养基的制备
培养过程中可能出现的问题预见
接种过程中的注意
数据处理
污染率 = 污染瓶数/总接种瓶数×100%
观察时间 第一次 第二次 第三次
… …
污染瓶数
总接种瓶数
污染率
2.培养基的灭菌
首先，往高压灭菌锅内（外层锅内加水），加 水水位高度不超过支柱高度 其次，将分装好的培养基及所需灭菌的各种用 具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内， 盖好锅盖，对称拧紧螺丝。 第三，加热高压灭菌锅，打开放气阀，待煮沸 排除冷空气后再关闭。 第四，锅上压力表指针开始移动，当指针移至 1.1－1.2 kg/㎝2，温度为121oC时，维持该 压力20min即可切断电源，待压力降为零后， 才能打开锅盖。
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取 此液10ml
3.铁盐母液的配制
铁盐如果用柠檬酸铁，则和大量元素一起 配成母液即可。 但目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四 乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。 这种螯合物使用起来方便，比较稳定，且 不易发生沉淀。
这种母液的配制方法是： 用电子天平称取2.78g硫酸亚铁 （FeSO4.7H2O）和3.73g乙二胺四乙酸二钠 （Na2-EDTA.2H2O），分别用约200ml蒸馏 水溶解，并分别加热煮沸，然后混和两种溶液 继续煮沸，冷却后定容至500ml，冰箱4℃低 温保存。配制培养基时，每配制1000ml培养 基取此液5ml。
表4 MS培养基有机物成分的称量及定容（50×）
烟酸 0.5 25
盐酸吡哆醇(维生素B6)
盐酸硫胺素(维生素B1)
0.5
0.4
25
20
甘氨酸
2.0
100
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
此液10ml
由于肌醇用量较大，在配制培养
基时单独直接称量加入
消毒剂： 200ml×2 3ml/100ml的次氯酸钠（15－25min） 酒精：200ml×2 75％左右（ 75 ml纯酒精＋ 25 ml水 ） （78.9 ml95%酒精＋ 21.1 ml水 ） 无菌水： 一组两瓶
实验五 生根培养
以前期培养的无菌体系材料为实验外植体 实验方法及步骤 1.继代培养基的配制
1/2 MS+IBA 0.5mg/L
其中：
吲哚丁酸（IBA） 95％酒精或1 N NaOH
2.接种前的准备
培养基、接种工具等的灭菌 超净工作台通风开关30min，紫外照射 15min进行灭菌。 3.接种 用无菌的剪刀和镊子将材料进行适当 的剪切并接入培养基中，作好标记，放 入培养室中进行培养。
如何处理外植体？
III 无菌培养体系的建立
内容要求：
列出接种所需器械及器皿 接种过程中的注意事项
培养过程中的观察情况
等
数据处理
污染率 = 污染瓶数/总接种瓶数×100%
观察时间 第一次 第二次 第三次 … …
15 20 25 15 20 25 处理时间 min min min min min min 污染瓶数
实习报告撰写
按照组织培养的一般过程： I 培养基制备与灭菌 II 外植体的处理 III 无菌培养体系的建立 IV 不定芽继代增殖 V 壮苗生根 分步撰写
I 培养基制备与灭菌
内容要求：
培养基母液配置
培养基制备
灭菌锅使用
II 外植体的处理
内容要求：
大致描述你为什么选择该外植体，
外植体选择过程中须考虑哪些问题？
注意
在超净工作台接种时，应尽量避免做明 显扰乱气流的动作，以免气流紊乱，造成 污染。材料要尽快处理和进行表面灭菌，
有利于启动培养。每瓶中灭菌材料2－3个
为宜，过多不宜灭菌彻底。
实验四 继代培养
以前期培养的无菌体系材料为实验外植体 实验方法及步骤 1.继代培养基的配制
MS+6-BA 0.25mg/L + NAA 0.05mg/L
注 意
若母液沉淀，必须及时重新配制； 吸取母液时要换算好母液倍数与吸取 的数量，防止出现差错；琼脂必须完
全溶解后进行分装，防止有的培养基
过硬，有的不凝固。
实验三 初代培养（外植体接种）
自选植物材料做实验外植体
实验方法及步骤
1.准备工作：配制75%酒精、3%的次氯酸钠。无 菌空瓶和无菌水应提前灭菌并晾凉。提前配 制培养基。 2.将接种工具，无菌水，培养基等置于接种台 上，打开超净台通风开关30min，紫外照射 15min进行灭菌。