A. B在 20×倍 视野下培养皿 盖上的马铃薯茎 线虫聚集成团情 况 B. 培养 43天后聚集到皿 盖上的马 铃薯茎线 虫 ( 1× ) C. B在 40 ×倍视野下的情况 A. Cul tu red Dit ylenchus dest ructor on cov er of pet ri dish ( B× 20) ; B. Cul tu red Di tylenchus dest ructor on cov er of pet ri dish f or 43 d ( 1 × ) ; C. Cul tu red Dit ylenchus dest ructor on cov er of pet ri di sh ( B× 40)
沉 降或用 离心机使 线虫快 速沉淀 ( 6000 /rpm, 3 6个重复中培养量最大的为 28, 000条 /皿 , 最小
mi n )。 加入各约 500 mg /kg 的青霉素和氯霉素 , 为 18, 000条 /皿 ,平 均为 23, 777条 /皿 ; 25℃黑
保持 5 mi n,离心后吸出消毒液。 再用无菌水冲洗 暗条件下培养 43d后 ,培养量最小为 46, 000条 /
Culture of Potato Rot Nemotode
X U Jin-jun1, 2 , L I Shi-dong1 and Y AN G Zhi-w ei2
( 1. Th e Chinese Academy of Agricult ural Sci ences, Bei ji ng 100081, China; 2. N o rthw est Sci-Tech U niversi ty of Agricult ure and Forest ry, Y angli ng Shaanxi 712100, China)
N otes: Th e res pective resul t i s nematod e s um of per cover of petri di sh. Direct cult ure by pieces of s weet po tat o. N emat odes on each
f ungi colony no more th an 10 000 p er Pet ri di sh. - : f ew , + + : man y, + + + : pl en tif ul.
cover and co ng regat ed tog ether there. Key words: Ditylenchus destructor; Fusarium solani; Culture
马 铃 薯 茎 线 虫 ( Ditylenchus destructor T horne, 1945)是一类比较重要的植物病原线虫 , 主要发生在温带地区 ,中国、美国、加拿大、秘鲁、 日本、新西兰、南非、等国家和地区分布比较广泛 , 危害严重。 它的寄主有马铃薯、花生、胡萝卜、甘 薯、大豆、烟草、番茄、大麦等约 90～ 120多 种植 物 [2, 3 ]。 在国外主要危害马铃薯和花生 ,在国内主 要危害甘薯 ,是我国甘薯上比较重要的一类病害。 而 获得 大 量 的、 具有 良 好 生 命力 的 线 虫群 体 是 研 究这种线虫的生理生化特性、致病机理、遗传特点 以及控制技术的最基本的前提。 韩国 Young 和 Seung 曾在 1995年进行了马铃薯茎线虫的离体
培养温度 /℃ Cul tu ral
t emperatu res
20
F. solani
B . cinerea
Chaetomi um sp .
重复 Ck总数 平均数
总数
平均数
总数
平均数
Sum. / Average / Sum. / Av erage / Su m. / Averag e/
(条· 皿 - 1) (条· 皿 - 1) (条· 皿 - 1 ) (条· 皿 - 1 ) (条· 皿 - 1 ) (条· 皿 - 1)
集发 病的 土 壤及 病薯。 茄腐 镰刀 菌 ( Fusarium solani )由中国农业大学植病生防室提供 ,灰葡萄 孢 ( Bot rytis cinerea Pers)由中 国农业大学提供 ,
收稿日期: 2004-06-10 修回日期: 2004-08-15 基金项目: 国家 863计划 ( 2001 A A246010) 作者简介: 徐进军 ( 1977- ) ,男 , 硕士研究生。
接 入 茄腐 镰 刀 菌 ( Fusarium solani )、灰 葡 萄 孢 上 ,基本没有爬到盖子上的情况。
( Botry tis cinerea Pers ) 和 毛 壳 菌 ( Chaetomium
利用甘薯薯块繁殖马铃薯茎线虫 ,也可得到
sp. ) , 25℃温箱中暗培养。待菌丝长满整个培养皿 大量马铃薯茎线虫 ,但要取得线虫 ,需要要用贝曼
摘 要 : 采用茄腐 镰刀菌 ( Fusarium solani)培养马铃薯 茎线虫 ,在 20℃黑暗条件下培养 43d,直径 9 cm的培 养皿每 皿活线虫 总数平均 为 23, 777条 /皿 ;在 25℃黑暗条 件下培养 周期 43d,每皿 一次可培 养出 46, 000至 72, 000条线虫 ,平均 60, 777条。 与 Yo ung 和 Seung 的培养结 果 ( 10, 000条 /皿 ) [1 ]相比 每皿多 50, 000条左 右 ,而且培养的线虫聚集在培养皿盖上 ,方法简单 ,培养量大 ,含 杂质少。 关键词: 马铃薯茎线虫 ;茄腐镰刀菌 ;培养 中图分类号: S432. 4+ 5 文献标识码: A 文章编号: 1004-1389( 2004) 04-0077-04
好的病薯小块放入漏斗中加入无菌水 ,下面用带 个温度作 6个重复。 培养 35～ 40 d后 ,用贝曼漏
橡胶管的指型管相连 , 24 h后取下指型管 , 吸去 斗漏斗法进行线虫分离 ,在倒置显微镜下观察计
表层水 ,将线虫置于 35% 的蔗糖溶液中离心 , 去 数。
除杂物及淀粉粒 ,然后 ,吸出 400至 500条线虫 , 在显微镜下去除腐生线虫。
Abstract: Thi s paper repo rt ed an im prov ed m ethod t o ha rv est a larg e num ber of Dit ylenchus desturctor, pat hogen of sw eet po ta to rot disease, i n labo rato ry conditi on. The nemato de w as cult ured f o r 43d o n colo ny of Fusarium solani at 20℃ under darkness, leadi ng to 23, 777 nema todes reproduced per cov er of Pet ri dish ( dia. 9cm ) , at 25℃ leading to 46, 000-72, 000 reproduced. Com paring w it h Yo ung Ho Ki m& Seung Hw an Ohh 's metho d, thi s method i s no t o nly mo re ef fici ent but also mo re si mple, and the nemato des gained is more clean because they m ov ed i nt o t he i nside o f the Pet ri dishes
1. 2. 1 线虫分离 将采集到的病薯用自来水冲
同时将 500条消毒后的甘薯茎线虫接种于约
洗干净 ,剖开病薯 ,用刀切成薄片 ,然后用镊子将 200 g 表面消毒后的甘薯块茎中 ,将接 种口用原
病薯撕成小块 ,在漏斗底部铺上两层餐巾纸 ,将切 薯块封好 [4] , 分别在 20℃和 25℃下黑暗培养 ,每
3遍 , 定容到一定体积 (可 在 4℃冰箱中保存 ) 备 皿 ,培养量最大为 72, 000条 /皿 ,平均 为 60, 777
用。
条 /皿。在毛壳菌和灰葡萄孢上培养 43 d后 ,线虫
1. 2. 3 线虫的培养 在 PDA(约 20 m L )平板中 量很小 ( < 10, 000条 /皿 ) ,而且大部分 在培养基
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西 北 农 业 学 报
1 3卷
毛壳菌 ( Chaetom ium sp. )为中国农科院生物防治 养皿盖上的线虫用无菌水 冲洗到灭菌的 50 m L
研究所缪作清先生提供。
离心管中 ,然后将线虫液定容到 20 m L,用振荡器
1. 2 方 法
震荡均匀吸取 10个 10μL在倒置显微镜下计数。
西北农业学报 2004, 13( 4): 77～ 80 Acta Agricultur ae Bo r ea li-occidentalis Sinica
马铃薯茎线虫的培养
徐进军 1, 2 ,李世东 1 ,杨之为 2
( 1. 中国农业科学院生物防治研究所 ,北京 100081; 2. 西北农林科技大学植物保护学院 ,陕西杨凌 712100)
培养 ,每个温度作 6个重复。 接种培养 2～ 3 d后 地域的限制。
将培养皿盖朝下放置 ,培养 35～ 40 d左右 ,将培
表 1 不同温度下马铃薯茎线虫 (Ditylenchus destructor )的培养
Table 1 Cultural result of potato rot nematode in diff erent temperatures
2 结果与分析
1. 2. 2 线虫的消毒 将分离到的线虫用无菌水
不同培养材料在不同温度条件培养马铃薯茎
洗出 ,冲入无菌的指型管中 ,用 0. 5% 的次氯酸钠 线虫 ( D. dest ructo r)的试验结果 (表 1)表明: 在