细菌检验人员及其培养教育
培养临床细菌室工作人员树立质量控制概念 • 什么是细菌检验中的质量：结果真实显示标本中 存在的病原菌及其生化特征和抗药性 • 什么是细菌检验中的质量控制：制定细菌检验的 质量水平，并采取监测手段，这一过程称为质量 控制。 • 质量保证：为达到应有的质量水平而采纳的措施 • 质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个 实验室或实验室中某项试验是否达到标准的过程
试剂、染色液及抗血清 的质量控制
• 试剂的保存方法（温度、避光） • 染液 • 抗血清的质量控制
常用试剂的质量控制
试剂 凝固酶血浆 杆菌肽纸片 阳性质控菌种 阴性质控菌种 监控频度 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 每天 A群链球菌 B群链球菌 新制者：每 批，以后每 周 金黄色葡萄球菌 A群链球菌 每天 铜绿假单胞菌 大肠埃希氏菌 新制者：每 批
抗生素敏感性试验的质控菌株
细菌名称 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 绿脓假单胞菌 粪肠球菌 淋病奈瑟菌 流感嗜血杆菌 肺炎克雷伯菌 菌号 ATCC 25923 ATCC 29213 ATCC 25922 ATCC 27853 ATCC 29212 ATCC 49226 ATCC 49247 ATCC 700603 用途 纸片扩散质控 MIC测定质控 纸片和MIC 纸片和MIC 胸腺嘧啶含量测定 淋球菌药敏 嗜血杆菌药敏 ESBL阳性菌
实验室方法标准化
细菌鉴定中方法标准化 • 有条件的单位，采用标准化自动或半自动的 自动化系统，如ATB、VITEK等 • 标本量少但有条件的单位可采用进口标准化 试剂：API、Micro Id，乳胶试剂 • 用国产试剂作鉴定单位，用相应标准菌株对 试剂作批批检
仪器设备的功能监测
• 灭菌器械的效果检测 化学指示剂测试法：无色 黑色 • 恒温孵育箱、冰箱 每天记录， 孵育箱35℃ ± 1 ℃ 普通冰箱4 ℃ ± 2 ℃ 冰格-5 ℃ ± 1 ℃ 低温冰箱-20 ℃ ± 5 ℃ 超低温冰箱-80 ℃ ± 10 ℃
室间质量评价的过程
EQA组织者 EQA参加实验室
准备质控样品
检测质控样品
分析结果
上报结果
反馈报告
自我评价与改进
室内质控
室内质控
• • • • • • • 细菌检验人员及其培养教育 仪器设备的功能监测 培养基的质量控制 试剂、染色液及抗血清的质量控制 处理临床标本的质量控制 质量控制用标准菌株 抗生素敏感试验的质量控制
细菌检验人员及其培养教育
操作手册的建立包括以下内容： • 规章制度 • 检验项目 • 细菌鉴定的最低要求及药敏试验 • 培养基及其制备 • 试剂、染色剂的制备 • 生物安全防护 • 参考数据及书籍 • 室内及室间质量控制
细菌检验人员及其培养教育
建立严格的质控制度 • 严格的QC记录制度，点图、表格或文字。 如：孵箱温度、冰箱温度、培养基质量记录 • 室内质控中失控记录 • 全民质控意识，不要把质控作为个别人的活 动 • 质控资料妥善保管，至少保存三年
质量控制用标准菌株
• 用途 试剂的质量控制 培养基的质量控制 抗血清的质量控制 染液的质量控制
质量控制用标准菌株
• 种类
大肠埃希菌ATCC25922 大肠埃希菌ATCC35218 （仅被推荐用于B-内酰胺霉抑制剂复合药，如含克 拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦的复合药的试验质控。） 铜绿假单胞菌ATCC27853 金黄色葡萄球菌ATCC25923 粪肠球菌ATCC29212 （可用于监测M-H琼脂中药物抑制剂的水平是否低 得可以接受。也可用于高含量氨基糖苷类纸片的质控） 流感嗜血杆菌ATCC49247（HTM时用） 流感嗜血杆菌49766（HTM时用） 淋病奈瑟菌ATCC49226（GC琼脂时用） 肺炎链球菌ATCC49619（M-H羊血琼脂时用）
处理临床标本的质量控制
• 标本的采集和运送 • 直接涂片 除血标本外的临床标本特别是痰标本应 做直接涂片 • 分离培养和鉴定 培养基的选择、培养方法、鉴定程序
处理临床标本的质量控制
• 标本的采集和运送 采集时间、操作全程无菌、采集样本量、 运送标本及时安全、特殊菌的采集、 • 直接涂片 意义
处理临床标本的质量控制
实验室方法的标准化-----培养基 细菌分离 • 血琼脂：哥伦比亚琼脂或胰大豆胨琼脂、5％绵羊血、 软琼脂或加适量抑制剂有利于肺炎链球菌生长 • 巧克力琼脂：脑心浸液、5％兔血、5mg/100m去甲万 古霉素有利于嗜血杆菌生长 • 卡它莫拉菌识别： * 可在血琼脂或巧克力上生长 * 灰略黄、干燥但可在盐水中乳化 * 35℃培养24－48h
培养基的质量控制
• 培养基的性能监测（1） 外观、灭菌、PH、平板深度、无菌试验、 硬度试验
培养基的质量控制
• 培养基的性能监测（2） 液体及分离用培养基的质量控制
培养基
血琼脂
质控菌株
化脓性链球菌 肺炎链球菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌
号码
ATCC19615 ATCC6305 ATCC25923 ATCC25922 ATCC43069 ATCC13090
仪器设备的功能监测
• 二氧化碳培养箱 每天记录，5% CO2 • 生物安全柜： 定期年检,滤器3个月校正一次， 合格后使用 • 其它仪器（天平、显微镜、加样器、游标卡尺） 保养、定期维修、正确使用、年检
培养基的质量控制
• 制备培养基的记录 名称、配方、数量、灭菌、日期等 水质、PH ±0.2、 • 培养基的外观检查 颜色、透明度 • 无菌试验
鉴定标准
生长，ß -溶血 生长，α –溶血 生长 生长 生长 生长
巧克力琼脂
淋病奈瑟氏菌 脑膜炎奈瑟氏菌
流感嗜血杆菌
肺炎链球菌
ATCC10211
ATCC6305
生长
生长
培养基的质量控制
液体及分离用培养基的质量控制（续）
培养基 营养琼脂 质控菌株 金黄色葡萄球菌 号码 ATCC25923 鉴定标准 生长
过氧化氢
氧化酶
几项外加试验的标准化
• 触酶试验：3％H2O2每三天更换一次 • 血浆凝固酶试验：混合（5个兔子〕兔血浆或商品乳胶试剂 • 氧化酶试验：1％盐酸四甲基对苯胺水溶液浸泡厚滤纸，室 温吹干压成小纸片，置含干燥剂容器－20℃保存，或买商 品制剂 • －内酰胺酶：头孢硝噻吩(Nitrocefin)为底物，适于测试嗜 血杆菌、淋球菌、卡他莫拉菌、肠球菌。 配制注意： 1、每片含量10－14ug/片 2、低温吹干， －20℃保存 3、易失活，测试时应作阴阳性对照
临床微生物室质量控制
北京医院 艾效曼
内容提要
涉及内容 室内质控 室间质评 • 建立方法及步骤（室内质控） • 纠控方法 • 范例 • 注意事项
质量管理的层次
世界级质量 TQM 质量管理 质量体系协调 效力
效率
质量保证 计划性/系统性活动 质量控制 操作技术
细菌室质控工作目的及重要性
• 确认科学先进的试验方法，使实验试剂规范化、 检测过程标准化、从业人员资格华，以便更好 的控制结果，减少偏差和错误，保证临床细菌 检验技术更好地发挥 • 为临床微生物工作者提供无法律责任的相关依 据，避免承担不必要的风险 • 服务于临床 • 耐药监测
实验室方法标准化之三
药物敏感试验中的方法标准化K－B法 • M－H定量，厚度4mm，9cm平皿23－25ml • 纸片－20 ℃保存，4 ℃保存现用纸片一周 • 菌液浓度0.5麦氏单位浊度 • M－H琼脂，用粪肠球菌ATCC49212测拭甲氧 苄氨嘧啶或磺胺异恶唑的含量，抑菌环>20mm 为合格 • 推荐MIC测定方法：微量稀释法、琼脂稀释法、 Etest方法、自动化仪器
小结：临床细菌室（实验室〕的质量控制和方法标准化 是一对相互制约的矛盾，实验室只有建立标准化方法 学才可能进行质量控制才能获得好的结果。
室间质评
室间质评 External Quality Assessment, EQA
• 也称为能力实验，是指多家实验室分析 同一标本并由外部独立机构收集、反馈 实验室上报结果并评价实验室检测能力 的活动 • 历史 • 必要性 • 内容及方法
质量控制用标准菌株
• 种类
金黄色葡萄球菌ATCC 29213 金黄色葡萄球菌ATCC 43300 粪肠球菌ATCC 51299 链球菌ATCC 49629（CAMHB时用）
抗生素敏感性试验的质量控制
• 方法学简介（纸片扩散法、肉汤和琼脂 稀释法、Etest法、仪器法） • 培养基 厚度4mm，是影响KB法准确性 最重要的因素 • 抗生素 • 培养条件 • 判读
室间质评
卫生部行业标准对临床细菌室室 间质评要求：
• ≥50％质控物为混合样本 • 要求操作者根据人口统计资料确定 需报告的病原菌 • 标本中含有细菌范围广，包括正常 菌群、条件致病菌和致病菌
导致室间质评失败的主要原因
• • • • • • • 检测仪器未经校准或有效维护 室内质控失控 试剂质量不稳定 实验人员的能力不能满足实验要求 上报结果抄写错误 EQA样本处理不当 EQA样本质量存在问题
生长，无色菌落 生长，无色菌落 生长，无色菌落 生长被抑制 部分被抑制 生长 生长，产气 生长 部分或完全抑制
厌氧血琼脂 沙保罗琼脂
脆弱拟杆菌 产气荚膜梭菌 白色念珠菌 大肠埃希氏菌
培养基的质量控制
例： • 血琼脂：哥伦比亚琼脂或胰大豆胨琼脂、5％ 羊血、软琼脂或加适量抑制剂有利于肺炎链球 菌生长 • 巧克力琼脂：脑心浸液、5％兔血、5mg/100ml 去甲万古霉素有利于嗜血杆菌生长
几种特殊细菌的药敏问题
• 肺炎链球菌：耐青霉素的肺炎链球菌或MDR • 呼吸道分离菌：1ug/片苯唑西林代替青霉素 作药敏，同时作红霉素、复“ S”。≤19mm作MIC，测青霉素、头孢噻 肟、头孢曲松的MIC • 无菌部位分离菌（CSF血液〕直接作青、噻 肟、曲松和万古MIC