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图示
• 分配系数的微小差异→吸附能力的微小差异 • 微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先
流20出20/7/2；8 吸附能力强的组分后流出back
㈡色谱分离原理 ▪ 色谱分离基于各组分在两相之间平衡分配的差异 ▪ 平衡分配可以用分配系数和分配比来衡量
㈢色谱分离特点 1．不同组分通过色谱柱时的迁移速度不等 →提供了分离的可能性 2．各组分沿柱子扩散分布→峰宽 →不利于不同组分分离
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思考题
• 色谱分离的原理及过程。
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第二节 薄层层析（ Thin-layer chromatography ）
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1、基本原理
薄层层析法是色谱分析技术的一种 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为
固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时， 由于吸附剂对不同组分的吸附力不一样，不同组分 在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合 样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此 分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进 行，而将样品各组分分离开来）
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内标物要满足以下要求： （a）试样中不含有该物质； （b）与被测组分性质比较接近； （c）不与试样发生化学反应； （d）出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰响。
内标法特点
(a) 内标法的准确性较高，操作条件和进样量的稍许 变动对定量结果的影响不大。 (b) 每个试样的分析，都要进行两次称量，不适合大 批量试样的快速分析。
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三、色谱流出曲线与术语
1.基线
无试样通过检测器时， 检测到的信号即为基线。
2.保留值
（1）时间表示的保留值 保留时间（tR）：组
分从进样到柱后出现浓度 极大值时所需的时间；
死时间（tM）：不与固定相作用的气体（如空气）的保 留时间；
调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－tM
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不足之处： 被分离组分的定性较为困难。
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色谱法的分类
1．按两相分子的聚集状态分类
流动相
液体 液体
固定相
固体 液体
类型 液-固色谱 液相色谱 液-液色谱
气体 气体
固体 液体
气-固色谱 气相色谱 气-液色谱
超临界流体色谱法——流动相为超临界流体
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色谱法分类（续前）
2．按固定相的固定方式分类
Rf of component B = dB dS
The Rf value is a decimal fraction, generally only reported to two decimal places2020/7/28
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Thin-Layer Chromatography: A TwoComponent Mixture
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
solvent front
component B
origin mixture
solvent front
component A origin
Increasing Development Time
色谱分析
第一节 色谱法概述
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一、 色谱法的特点、分类和作用
混合物最有效的分离、分析方法。 俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置： 色谱原型装置，如图。 色谱法是一种分离技术， 试样混合物的分离过程也就是试样中各组 分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的 分配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流 体（气体或液体），称为流动相。
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solvent front
component B Less polar!
component A More polar!
origin
Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Values
Rf of component A = dA dS
（2）用体积表示的保留值
保留体积（VR）： VR = tR×F0
F0为柱出口处的载气流量， 单位：m L / min。
死体积（VM）： VM = tM ×F0
调整保留体积(VR＇)： V R＇ = VR －VM
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3. 区域宽度 用来衡量色谱峰宽度的参 数，有三种表示方法： （ 1 ） 标 准 偏 差 ( ) ： 即 0.607 倍 峰高处色谱峰宽度的一半。 （2）半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一 半处的宽度 Y1/2 =2.354 （3）峰底宽(Wb)：Wb=4
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外标法
外标法也称为标准曲线法。
特点及要求： • 外标法不使用校正因子，准确性较高 • 操作条件变化对结果准确性影响较大 • 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批 量试样的快速分析
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四、分配系数与色谱分离
㈠分配系数和容量因子：相平衡参数
分配系数K(平衡常数)：指在一定温度和压力下， 组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与流动 相中的浓度比（色谱过程的相平衡参数）
K CS Cm
注：K为热力学常数
与组分性质、固定相性质、流动相性质及温度有关 实验条件固定，K仅与组分性质有关
柱色谱
填充柱色谱 毛细管柱色谱
纸色谱
平面色谱 薄层色谱
高分子薄膜色谱 毛细管电泳
3．按分离机制分类
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分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 空间排阻色谱 毛细管电咏法 毛细管电色谱法
二、色谱过程、分离原理及特点
㈠色谱过程 指被分离组分在两相中的“分配”平衡过
程 ✓以吸附色谱为例见图示
吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反复多 次洗脱→被测组分分配系数不同→ 差速迁 移 → 分离
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色谱法的特点
（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
（3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
（4） 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。