样品用乙腈-水（50+50） （碳酸盐缓冲液调pH至
8.0）振荡提取
过滤，滤液用 0.1%的BSA洗
液稀释
加样品后，加抗AFTB1 单克隆抗体，37℃孵育
后，洗去多余抗体
包被抗原包被酶标板， 4℃过夜后洗去多余抗原
加辣根过氧化物酶标记 的羊抗鼠IgG ，37℃孵 育后，洗去多余抗体
加底物四甲基联苯 胺溶液， 37℃孵育
定量
以0.04μg/ml 的AFTB1标准使用液10 μl 作定量基准，样品液稀释到此浓度
（荧光强度相当）进行计算
最低检出量法
酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay) 是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
测定 定性
定量
3.确证实验
喷MBTH•HCl溶液， 130℃烘烤15min，冷
却后365nm下观察
薄层扫描外标法
第四节 DON和NIV的检测
DON和NIV溶于水、 甲醇和乙醇，热稳定。
请同学们按照前面的图绘出DON和NIV 的薄层色谱展开前后的可能结果
样品处理
样品加正己烷和 甲醇-水（55+45）
振荡提取
滤液水浴挥干、冷却， 用苯-乙腈（98+2）溶
解残渣作点样液
取甲醇-水 层，用三氯
甲烷萃取
三氯甲烷层用 无水硫酸钠脱
水、过滤
测定
定性
1.检查AFTB1
2.检查AFTB2a
365nm，Rf值0.6，
加TFA水解
蓝紫色荧光点
AFTB1， Rf值0.1
后硫酸终止反应
包被抗原 AFTB1 底物
AFTB1单克隆抗体
辣根过氧化物酶标 记的羊抗鼠IgG 杂质成分
酶标板
酶标板
酶标板
酶标板
酶标板
第二节 赭曲霉毒素A的检测
赭曲霉毒素是一类化学结构和性质相近 的化合物，现已分离鉴定出4种，其中 赭曲霉毒素A（OTA）是最主要的。
微溶于水、石油醚，酸性条件下溶于苯、 三氯甲烷和稀碳酸氢钠溶液，碱性条件 下成盐并溶于水；在紫外线照射下会分 解。
样品处理
样品加三氯甲烷 和0.1mol/L磷酸振
荡提取后过滤
滤液加碳酸 氢钠溶液振
荡萃取
取三氯甲烷层水浴挥干， 用苯-乙腈（98+2）溶
解残渣作点样液
取水层用稀盐 酸调pH2-3，加 三氯甲烷萃取
测定 定性
1.横展除杂
2.纵展定性
365nm 黄绿色荧光点
测定 定性
3.确证实验
喷碳酸氢钠乙醇溶 液，365nm下观察
定量 最低检出量法
第三节 展青霉素的检测
展青霉素溶于水和乙醇，在碱性溶液中 不稳定，在酸性溶液中较稳定，耐热。
样品处理鲜果、果酱源自果汁、果酒加无水硫 酸钠研磨
加乙酸乙酯 振荡浸泡
少许三氯 甲烷定容
取乙酸乙酯层 减压浓缩近干
过滤，滤液加稀 碳酸钠溶液振荡
测定 定性
1.横展
2.纵展
254nm，Rf值0.35 黑色斑点
基本原理 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，通过
酶与底物产生颜色反应进行定性与定量。抗原或抗体 均可作为测定的对象。
方法特点 具有操作简单，分析通量大、快速，特异
性强，分析灵敏度高等特点。 3种必要的试剂
1 固相的抗原或抗体
2 酶标记的抗原或抗体
3 酶作用的底物
【主要仪器与试剂】
1 移液器 2 酶标仪 3 洗板机 4 酶标板 5 试剂盒
第八章 霉菌毒素的检测
第一节 黄曲霉毒素的检测
黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构和 性质相近的化合物，现已分离鉴定出20 种以上。
难溶于水、乙醚、石油醚等，易溶于甲醇、 三氯甲烷、苯、乙腈等。 TLC法检测定位和定性
在紫外线照射下可发出荧光。
在强酸性和碱性溶液中不稳定，对氧化剂也
不稳定。
TLC法的确证检测