工厂化生产金针菇液体菌种配方开发及应用作者：姚强宫志远司洪宇黄春燕韩建东梁晓辉张元祺李瑾谢红艳来源：《山东农业科学》2020年第11期摘要：针对山东地区金针菇工厂化、规模化生产实际，以当地主栽白色金针菇品种为供试菌株，以菌丝球直径、密度及菌丝体干重为检测指标，以不同材料的碳源、氮源、维生素为影响因素，研究筛选适合本地生产的金针菇液体菌种培养基配方。
结果表明：适宜金针菇栽培的最佳液体菌种培养基配方为：可溶性淀粉3%、豆奶宝0.33%、磷酸二氢钾（KH2PO4）0.080%、硫酸镁（MgSO4）0.075%和VB2 50 mg/L。
关键词：白色金针菇;液体菌种;培养基中图分类号：S646.1+5 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2020）11-0134-04Formula Development and Application of Liquid Strain of〖WTHX〗Flammulina velutipes in Factory ProductionYao Qiang1，Gong Zhiyuan1，Si Hongyu2，Huang Chunyan1，Han Jiandong1，Liang Xiaohui2，Zhang Yuanqi1，Li Jin1，Xie Hongyan1（1.Institute of Agricultural Resources and Environment， Shandong Academy of AgriculturalSciences/ Key Laboratory of Wastes Matrix Utilization， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Jinan 250100， China;2.Energy Research Institute of Shandong Academy of Sciences/ Shandong KeyLaboratory of Biomass Gasification Technology， Jinan 250000， China）Abstract Aiming at the factory and large-scale production of Flammulina velutipes in Shandong area， the local main cultivated white Flammulina velutipes variety was used as test strain， the diameter， density and dry weight of mycelium were used as detection indicators， and the carbon source， nitrogen source and vitamins were as the influencing factors to screen out the formula of Flammulina velutipes liquid culture medium suitable for local production. The results showed that the best liquid culture medium formula for Flammulina velutipes was 3% of soluble starch，0.33% of soy milk treasure， 0.080% of potassium dihydrogen phosphate （KH2PO4），0.075% of magnesium sulfate （MgSO4） and 50 mg/L VB2 .Keywords White Flammulina velutipes; Liquid strain; Culture medium我国是最早人工栽培金针菇的国家。
传统的固体栽培模式受各方面条件和季节性限制较强，生产周期长，操作步骤繁琐，难以大规模机械化生产，制约着整个金针菇产业的发展。
近年来，食用菌工厂化生产以金针菇发展最为迅速[1-3]。
白色金针菇（Flammulina velutipes）是一种低温型、含锌等微量元素高的优质食用菌[4，5]，属真菌门担子菌亚门蘑菇目口蘑科类火菇属，又有冬菇、金菇、构菌、毛柄类火菇、朴菇、智力菇之称，也是一种多糖类物质丰富、高蛋白低热量的保健性食品，具有食疗及药用效果[6-10]。
目前金针菇生产主要为液体菌种栽培模式，具有生长周期短、出菇整齐、产量稳定、成本低廉、效率高等优点而被广泛认可[11-13]。
此外液体菌种有发育菌龄一致、操作便利、分散性强等特点，为金针菇规模化、机械化生产提供了良好条件[14，15]。
液体菌种栽培模式是金针菇产业一个重要应用[16]，如何给予菌丝体最适生长环境、最适营养配比，使菇产量、菇品质达到理想状态，是金针菇精准化生产的重要研究方向之一。
本试验针对山东地区金针菇工厂化、规模化生产实际，以当地主栽白色金针菇品种为供试菌株，以菌丝球直径、密度及菌丝体干重为检测指标，以不同材料的碳源、氮源、维生素为影响因素，研究筛选适合本地生产的金针菇液体菌种培养基配方，以期为金针菇产业发展提供技术支撑。
1 材料与方法1.1 试验材料本试验于2019年在山东省友硕生物科技股份有限公司进行。
1.1.1 菌种白色金针菇（Flammulina velutipes）SDM-12，由山东省农业科学院农业资源与环境研究所保藏并提供。
1.1.2 培养基①斜面培养基[17]：马铃薯200 g/L，葡萄糖20 g/L，琼脂20 g/L。
②碳源筛选基础培养基：豆粕0.33%，硫酸镁0.075%，磷酸二氢钾0.080%，VB1 50 mg/L，pH自然。
③氮源筛选基础培养基：白砂糖3%，硫酸镁0.075%，磷酸二氢钾0.080%，VB1 50 mg/L，pH 自然。
④維生素筛选基础培养基：白砂糖3%，豆粕0.33%，硫酸镁0.075%，磷酸二氢钾0.080%，pH自然。
所用原料均为普通市售原料。
1.1.3 仪器设备主要有超净工作台、生化恒温培养箱、全温度恒温培养振荡器、高压蒸汽灭菌锅、500 mL三角瓶若干、试管若干、电子分析天平。
1.2 培养方法取出试验所用菌种，无菌条件下转接试管，25℃生化培养箱恒温培养至菌丝长满斜面，挑选菌丝浓密、粗壮、无污染的试管种备用。
1.3 試验方法1.3.1 不同碳源液体培养基对金针菇菌丝生长的影响在各供试碳源筛选基础培养基中分别添加3%的葡萄糖、麦芽糖、白砂糖、可溶性淀粉、乳糖，试验设置3个平行。
置往复式摇床20℃、190 r/min培养7 d后，检测菌丝球干质量，确定最适碳源。
1.3.2 不同氮源液体培养基对金针菇菌丝生长的影响在各供试氮源筛选基础培养基中分别添加0.33%的豆面、豆粕、豆奶宝、蛋白胨、玉米粉，试验设置3个平行。
置往复式摇床20℃、190 r/min培养7 d后，检测菌丝球干质量，确定最适氮源。
1.3.3 添加不同维生素的液体培养基对金针菇菌丝生长的影响在各供试维生素筛选基础培养基中分别添加30 mg/L的VB1、VB2、VB6，试验设置3个平行。
置往复式摇床20℃、190 r/min培养7 d后，检测菌丝球干质量，确定最适维生素。
1.4 指标检测[18，19]菌丝球密度计数法：取培养液1 mL，用无菌水稀释至10 mL，均匀后取1 mL平涂于平皿中，平皿底部衬深色背景计数。
菌丝球干重法：取培养液100 mL，经80目网筛过滤，洗涤至水变清后把菌丝放置在恒重过的定性滤纸上面，再置于80℃恒温干燥箱中烘至恒重称重（期间2～3次测重，直至各次测重相同或差别在允许误差范围内达标）。
pH值用pH计测定。
生长指标观测：培养7 d后观察各摇瓶中菌丝球大小、密度。
菌丝球密集、体积多为5 mm以下均匀分布者菌丝生长情况则为良好。
2 结果与分析2.1 不同碳源对菌丝生长的影响由表1、图1可知，不同碳源对于菌丝生长的影响差异明显。
其中可溶性淀粉作为培养基碳源时菌丝干重为0.0167 g/mL，pH为6.30，菌丝球小、密度大，菌液清亮，生长快;麦芽糖和白砂糖作为培养基碳源时效果相近，菌丝干重分别为0.0136、0.0122 g/mL，pH分别为6.44、6.58;乳糖和葡萄糖作为培养基碳源时菌丝干重分别为0.0094、0.0116 g/mL，pH分别为6.26、6.72。
不同碳源对菌丝生长的影响大小依次为：可溶性淀粉>麦芽糖>白砂糖>葡萄糖>乳糖，其中白砂糖成本最低。
因此，金针菇工厂化生产过程中液体菌种制备培养基碳源首选可溶性淀粉，其次为白砂糖。
2.2 不同氮源对菌丝生长的影响由表2可知，豆奶宝作为培养基氮源效果最好，菌丝干重为0.0173 g/mL，且菌丝球小、密度大，菌液清，菌丝生长快;玉米粉作为培养基氮源，菌丝干重为0.0158 g/mL;豆面和豆粕作为培养基氮源，菌丝干重分别为0.0127、0.0155 g/mL;蛋白胨作为培养基氮源，菌丝干重为0.0151 g/mL。
不同氮源对于菌丝生长的影响大小依次为：豆奶宝>玉米粉>豆粕>蛋白胨>豆面。
豆奶宝是以大豆为原料，经过粉碎、去皮、浸提、分离、洗涤、干燥等加工工艺，去除其油脂、低分子可溶性非蛋白组分后所制得的含有65%（干基）以上蛋白质的产品。
玉米粉内含大量生物素，可为金针菇提供所需的维生素等。
而豆粕因其来源及提取工艺差异影响，营养成分有所不同;豆面则由大豆直接粉碎而成，其成分最为复杂且蛋白质含量最低。
早期研究表明豆面和豆粕中含有能抑制菌丝生长的抗胰蛋白酶等物质。
本试验经对比分析，表明作为氮源以豆奶宝效果为佳，其次为玉米粉。
2.3 不同B族维生素对菌丝生长的影响由表3可知，B族维生素中，VB2对金针菇菌丝生长效果最好，菌丝干重为0.0121g/mL，且菌液中菌丝球小，密度大，菌液清亮，菌丝生长快;VB6同空白对照对菌丝生长效果不大。
B族维生素对于菌丝生长的影响大小依次为：VB2>VB1>VB6。
本试验表明维生素添加以VB2效果为佳。
3 讨论与结论金针菇属于低温型木腐菌，不同的碳源、氮源种类包括环境条件等因素都对其良好生长发育有着直接影响。
金针菇属于B族维生素缺陷型菌株，B族维生素的补充对其菌丝生长发育有很大影响。
本试验基于金针菇菌株特殊营养需求所作研究表明，适宜金针菇栽培的最佳液体菌种培养基配方为：可溶性淀粉3%、豆奶宝0.33%、磷酸二氢钾（KH2PO4）0.080%、硫酸镁（MgSO4）0.075%、VB2 50 mg/L。