FAN Xing-liang，YING Zhi-fang，LI Chang-gui，BAI Dong-ting，WANG Jun-zhi （ National Institute for Food and Drug Control，Beijing 100050，China）
Abstract： Objective To establish the new national reference panel in detection of HCMV IgM antibodies． Methods 5 positive samples and 12 negtive samples of HCMV IgM antibodies were collected，respectively． Identification and verification were carried out by uing six commercial HCMV detection kits registered in China and / or foreign countries． Results The sensitivity and accuracy of the panel are in line with the requirements of national reference material of P． R． China． Conclusions The panel is suitable to be used as the reference in quality control for HCMV IgM diagnostic reagents． Key words： Human cytomegolovirus（ HCMV） ； National reference panel ； Quality control； IgM
对参考品进行 4 ℃ 稳定性、37 ℃ 稳定性和冻融 稳定性考核。存放条件如下： ① － 70 ℃ 存放； ② 反 复冻融 5 次； ③ 4 ℃ 存放 14 d； ④ 37 ℃ 存放 1 d； ⑤ 37 ℃ 存放 3 d； ⑥ 37 ℃ 存放 7 d； ⑦ 37 ℃ 存放 14 d。 取出后进行稳定性检测和均匀性检测。
人巨细胞病毒也称人疱疹病毒 5 型 （ Human herpesvirus 5，HHV5） ，属 β 疱疹病毒亚科，在全世界 不同种族人群中都是普遍存在的病原体，感染率很 高，其流行因地区和社会经济状况不同而有区别，北 美和欧洲成年人群中抗体阳性率为 50% ～ 80% ，而 亚洲与非洲的人群中抗体阳性率近 100% ，社会经 济状况较好的成年人感染率较低，而社会经济状况 较差的人群感染率高。HCMV 的毒力较弱，侵入机 体后一般不会使器官和组织受到严重损伤，但一旦 该病毒基因整合在受精卵细胞的相关基因后，则可 阻止或影响后者的复制和表达，最后导致不可逆的 形态和结构的异常。临床表现为巨细胞包涵体病，
上述 6 种诊断试剂分别以不同检测原理的捕获 法 / 二步法、捕获法 / 一步法、化学发光法、荧光法及 金标法等对初筛样品进行检测，所用检测抗原既有
HCMV 灭活病毒也有不同的重组蛋白。
2结果
2． 1 参考品组成 从 11 836 份样本中筛选出强、中、弱阳性样本
共 5 份，作为阳性参考品，编号为 P1 ～ P5； 筛选出阴 性样本和阴性高值样本共 9 份，作为阴性参考品，编 号为 N1 ～ N9； 筛选出 1 份中值样本，依次梯度稀释 成 5 个稀释度，分别编号为 S1 ～ S5，其中 S4 略高于 临界值，另外还筛选出 1 份阴性样本作为 S6； 筛选 出 1 份中等偏弱阳性样本作为精密度参考品，标记 R。 2． 2 参考品标定 2． 2． 1 参考品验证： 按照说明书分别采用 6 种不同 方法的试剂对 HCMV IgM 抗体质控盘进行检测，结 果如表 1 所列。
① 组作为对照组，与②组至⑦组的考核结果对 比： P1 ～ P5 的结果符合，其 A 值逐渐降低； N1-N9 的 结果符合，N1 ～ N7 在④组和⑤组存放条件下的 A 值逐渐增 加，N8、N9 在 不 同 存 放 条 件 下 变 化 较 稳 定； 而在 S1 ～ S6 的结果中，S1 ～ S6 在不同存放条件 下，其 A 值逐渐降低； ②组和③组的结果符合； ④组 至⑦组至检测到 S3，比对照组低一个梯度。此参考 品稳 定 性 试 验 结 果 提 示，5 次 冻 融 对 参 考 品 中 的 HCMV IgM 抗体活性没有影响。在精密性方面，经 过破坏的样本及对照样品变异系数均小于 15% ，并 且由于其均值降低，致使其 CV 较对照组偏低，考核 结果见表 3。
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1 材料与方法
1． 1 材料 1． 1． 1 样本来源 自 2005 年开始从河南、广西、黑 龙江、山 东、北 京、广 东、湖 北 等 地 收 集 用 于 研 制 HCMV IgM 抗体国家参考品的样本，2006 年 3 月至 2008 年 1 月，用多家公司的 HCMV IgM 抗体诊断试 剂盒对候选参考品进行筛选后，对检测结果进行分 析，从中筛选出参考品样本。 1． 1． 2 主要仪器和试剂 分别选取已在国外上市 的及国内批准的 6 种 HCMV IgM 抗体检测试剂，编 号命名为 A、B、C、D、E、F 试剂。 1． 2 方法
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同厂家试剂盒的反应模式和灵敏度的差异，本研究 将最低检出限设定为 S3，S4、S5 样品可以检测为阳 性或阴性，见表 2。
表 2 稀释样本的检测结果 Tab． 2 Detective results for diluted samples
标本序号ห้องสมุดไป่ตู้
P1 P2 P3 P4 P5 N1 N2 N3 N4 N5 N6 N7 N8 N9
A 捕获法 （ A 值） 0． 827 2． 029 0． 755 0． 708 0． 873 0． 084 0． 029 0． 021 0． 035 0． 031 0． 028 0． 018 0． 029 0． 026
收稿日期： 2012 -02 -01； 修回日期： 2012 -04 -27 基金项目： 新型体外诊断试剂质量评价体系和国家参考物质研究
（ 2011AA02A115） 作者简介： 范行良，副研究员，主要从事病毒类诊断试剂及疫苗质量
控制工作。 通信作者： 王军志，研究员，主要从事生物制品质量控制工作。E-
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·论 著·
人巨细胞病毒 IgM 抗体国家参考品的研制
范行良，英志芳，李长贵，白东亭，王军志
（ 中国食品药品检定研究院，北京 100050）
5． 408 1． 714 7． 433 6． 513 7． 353 0． 186 0． 359 0． 303 0． 230 0． 247 0． 331 0． 147 0． 158 0． 162
F 金标法 （ 条代）
++ +
++ +
+++ － － － － － － － － －
结果 符合率
6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6 6 /6
表 1 阳性和阴性参考品的检测结果 Tab． 1 Detective results for the positive and negative references
B
C
D
E
捕获法 （ A 值）
捕获法 （ A 值）
化学发光法 （ 发光值）
微粒法 （ 荧光强度）
0． 254 1． 379 0． 268 0． 413 0． 334 0． 024 0． 014 0． 024 0． 043 0． 020 0． 020 0． 013 0． 031 0． 020
目前，国内外已有多家实验室及试剂生产厂家 和公司研制、生产 HCMV IgM 抗体检测试剂，用于 检测 HCMV IgM 抗体。由于生产条件不一、标准各 异，试剂的 灵 敏 度 及 精 密 性 会 有 所 差 异，因 此 建 立 HCMV IgM 抗体国家参考品，对于 HCMV IgM 抗体 检测试剂的标准化和规范化，促进 HCMV IgM 抗体 检测试剂的健康、有序发展具有重要意义。
用多种方法学的试剂检测阳性参考品和阴性参 考品，结果符合率均为 6 /6，与预期一致，见表 1。 2． 2． 2 最低检出限设定 分别用 3 种试剂对最低 检出限系列参考品进行检测。每份样品分别检测
5 次。 试验表明，A、D、E 3 种试剂对 S1、S2、S3 样品检
测结果均为阳性，S4 样品检测结果开始出现差异， S5、S6 样品检测结果均为阴性。考虑到在国内外不
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病儿有肝脾肿大、血小板减少性紫癜及溶血性贫血， 少数是先天性畸形，如小头、智力低下、神经肌肉运 动障碍、耳聋、脉络膜视网膜炎等。由于 HCMV 引 起先天性畸形的症状常在出生后几月到几年表现出 来，主要为智力低下，因此成为围产医学和优生学中 的重大研究课题。另外，HCMV 与骨髓移植失败、单 核细胞增多症都有很大的相关性。鉴于 HCMV 在 临床疾病中的重要作用，已经引起医学界的广泛重 视。近年来对 HCMV 感染的实验室诊断研究集中 于孕妇的筛查及患者免疫状态评价、产前诊断、新生 儿的早期诊断及器官移植受者感染的检测等。