实验报告注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验研究机构名称：试验负责人：试验及报告者：试验起止日期：研究机构地址：研究机构电话：委托单位名称：委托单位地址：委托单位联系电话：目录依从性声明 (1)QAU陈述 (2)摘要 (3)1注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验 (4)1.1 样品制备 (4)1.2 动物准备 (4)1.3 实验步骤 (4)1.4 结果 (4)1.5 结果判断 (6)2注射用盐酸头孢甲肟对家兔红细胞体外溶血试验 (8)2.1 样品准备 (8)2.2 动物准备 (8)2.3 实验步骤 (8)2.4 结果 (9)2.5 结果判断 (9)参考文献 (9)依从性声明试验名称：注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验试验编号：本试验是按照中华人民共和国国家食品药品监督管理局《药物非临床研究质量管理规范》（国家食品药品监督管理局局令第2号，2003年9月1日生效）完成。
试验过程遵照试验方案及本机构相关标准操作规程，无影响试验结果和结论可靠性的偏移或其它异常情况。
本报告如实地反映了试验材料、试验方法和试验结果。
试验负责人：签名：日期：年月日QAU陈述试验名称：注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验试验编号：试验负责人：为确保试验能够严格执行试验方案的内容，并按照本机构SOP操作，QAU 对试验方案、试验实施过程和试验记录等进行了检查，并审查了原始数据、试验报告，报告中所述的操作程序、试验方法和试验结果如实地反映了试验原始资料的内容。
QAU检查项目、检查日期及报告日期如下：检查项目检查日期报告试验负责人日期报告机构负责人日期试验方案2011.11.02 2011.11.04 2011.11.04标准操作规程(SOP) 2011.11.07 2011.11.09 2011.11.09 试验过程2011.11.14 2011.11.16 2011.11.16试验记录2011.12.06 2011.12.08 2011.12.08原始数据2011.12.07 2011.12.09 2011.12.09试验过程2012.01.06 2012.01.08 2012.01.08试验记录2012.01.09 2012.01.11 2012.01.11原始数据2012.01.09 2012.01.11 2012.01.11试验报告2012.01.13 2012.01.16 2012.01.16试验QA：签名：日期：年月日QAU负责人：签名：日期：年月日摘要本试验包括注射用盐酸头孢甲肟（规格：1 g/瓶）对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验。
注射用盐酸头孢甲肟，1 g/瓶，重庆圣华曦药业股份有限公司生产，批号100801。
本品主要成分为盐酸头孢甲肟，为白色至微黄色结晶性粉末。
用法与用量：1.成人：轻度感染：一日1-2g，分2次静脉滴注；中、重度感染：可增至一日4g，分2-4次静脉滴注。
也可根据临床情况进行剂量调整。
2.小儿：轻度感染：一日每公斤体重40-80mg，分3-4次静脉滴注；中、重度感染：可增至一日每公斤体重160mg，分3-4次静脉滴注；脑脊膜炎：可增量至一日每公斤体重200mg，分3-4次静脉滴注。
在对家兔的血管刺激性试验中，使用家兔9只，采用同体左右侧自身对照。
于家兔的左耳静脉注射给予生理盐水（9mg/ml），相同给药容量供试品或上市品（20mg/ml）于家兔的右耳静脉注射给予。
每天给药一次，连续给药7天。
于每天给药前以及最后一次给药后48小时进行临床观察和给药局部观察，于给药完成后48小时进行病理组织学检查，按血管刺激实验标准分级。
试验过程中，注射用盐酸头孢甲肟按临床成人最大用药浓度给药，每日1次兔耳缘静脉注射，每次20mg/ml，连续7天，肉眼及组织学检查相较生理盐水组均未见异常，无刺激性。
两侧对比无明显差异。
结果表明，注射用盐酸头孢甲肟采用20mg/ml浓度静脉注射对家兔耳缘静脉无刺激作用。
家兔红细胞体外溶血试验中，设置5个供试品组及阳性和阴性对照组。
开始时每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，观察3小时，观察红细胞溶解及凝聚情况。
试验过程中，阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生，供试品组管中的溶液在3小时内未发生溶血和凝聚，红细胞形态正常。
结果表明，注射用盐酸头孢甲肟在本试验条件下不产生溶血或红细胞聚集作用。
本试验根据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》的要求，进行了注射用盐酸头孢甲肟特殊安全性试验，供临床参考。
1注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验1.1 样品制备供试品为重庆圣华曦药业股份有限公司生产的注射用盐酸头孢甲肟（批号100801），对照上市品为Takeda Phamaceutical Company Lmited, Hikan Plant.生产(批号：HK566；进口药品注册号：H20090190)。
分别用0.9%氯化钠注射液配制成20 mg/mL的溶液。
阴性对照品0.9%氯化钠注射液，由西南药业有限公司生产（批号11111019）。
1.2 动物准备日本大耳白兔，体重2-2.5 kg，购于第三军医大学实验动物中心，饲养于第三军医大学实验动物中心动物房。
生产许可证号：SCXK（军）2007-015，使用许可证号：SYXK（军）2007-037。
试验前于动物房饲养1周以适应环境。
1.3 实验步骤给药：供试品组使用家兔6只，于家兔的左耳静脉注射给予生理盐水，相同给药容量供试品（20mg/ml）于家兔的右耳静脉注射给予。
上市品组使用家兔3只，给药剂量同供试品组。
供试品及上市品组给药容积均为5mL /kg。
用6号头皮针于耳缘静脉注射给药，针尖穿刺血管的方向为由远心端至近心端，给药速度为2-3mL/分钟。
每天给药一次，连续给药7天。
观察：于每天给药前以及最后一次给药后48h对动物和注射部位进行肉眼观察，于给药完成后48小时行病理组织学检查，按血管刺激实验标准分级。
评分标准见表1。
1.4 结果各组每次给药前以及末次给药后48 h，肉眼观察注射部位，实验侧（右侧）仅见血管轻度扩张，无明显充血、淤血，纹路清晰，周围组织无水肿，与生理盐水侧（左侧）比较无差别，记分为零。
换算成相应的反应级分值见表2。
单次观察累计得分为0，无刺激性（图1）。
表1. 血管刺激试验记分观察方法血管刺激性评分标准血管刺激性判断标准观察指标评分标准得分累计得分判断标准肉眼血管正常0＜0.5 无刺激性血管轻度充血发红，纹路清晰 1血管充血发红，纹路不清晰 2＜2.5 轻度刺激性血管重度充血，呈紫红色 3周围组织无水肿0＜4.5 中度刺激性轻微水肿 1明显水肿 2＞4.5 重度刺激性重度水肿 3光镜血管内皮及血管壁完整0＜0.5 无刺激性内皮损伤 1血管栓塞 2＜2.5 轻度刺激性血管破裂 3周围组织正常0＜4.5 中度刺激性水肿 1出血 2＞4.5 重度刺激性炎症细胞浸润 3表2 血管刺激试验肉眼观察记分表分组兔号1st2nd3rd4th5th6th7th7th后48h 右左右左右左右左右左右左右左右左供试品组血管1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 05 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 06 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 周围组织1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 05 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 06 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0上市品组血管1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 周围组织1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0（右侧为实验侧，左侧为生理盐水）图1. 7th后48h兔耳照片（均为供试品组）注射7天结束后48h，试供品组取三只兔，左右耳各取1cm长一段血管连同周围组织行病理检查；上市品组取两只兔，左右耳各取1cm长一段血管连同周围组织行病理检查。
其余兔继续饲养14天后取血管连同周围组织行病理检查。
观察结果：供试品组：实验侧与对照侧组均显示血管无充血，血管内皮完整，无血栓形成，无炎性细胞浸润，血管周围组织无明显改变（图2）；上市品组：实验侧与对照侧组均显示血管无充血，血管内皮完整，无血栓形成，无炎性细胞浸润，血管周围组织无明显改变（图3）；换算成相应的反应级分值（见表3），供试品组与上市品累计得分均为0，无刺激性。
1.5 结果判断注射用盐酸头孢甲肟（批号100801）按临床成人最大用药剂量给药，每日1次兔耳缘静脉注射，每次5ml/kg ( 20mg/ml )，连续7天，肉眼及组织学检查相较生理盐水组均未见异常，无刺激性。
两侧对比无明显差异。
表明注射用盐酸头孢甲肟采用20mg/ml浓度静脉注射对家兔耳缘静脉无刺激作用。
图2 兔耳缘静脉血管刺激试验组织学切片左为供试品，右为生理盐水图3 兔耳缘静脉血管刺激试验组织学切片左为上市品，右为生理盐水表3 血管刺激试验病理观察记分表分组兔号右（实验侧）左（生理盐水侧）供试品组血管1 0 02 0 03 0 04 0 05 0 06 0 0周围组织1 0 02 0 03 0 04 0 05 0 06 0 0上市品组血管1 0 02 0 03 0 0 周围组织1 0 02 0 03 0 02注射用盐酸头孢甲肟对家兔红细胞体外溶血试验2.1 样品准备供试品为重庆圣华曦药业股份有限公司生产的注射用盐酸头孢甲肟（批号100801），对照上市品为Takeda Phamaceutical Company Lmited, Hikan Plant.生产(批号：HK566；进口药品注册号：H20090190)。
供试品与上市品分别用0.9%氯化钠注射液配制成20 mg/mL的溶液。