实验操作
实验仪器
⑴ 载板
⑵ 固定相（吸附剂）或载体 ⑶ 涂布器 ⑷ 点样器 ⑸ 展开室
实验操作
1 薄层板的制备
吸附剂（硅胶）
粘合剂、添加剂
调制
涂布
玻璃板
调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。 均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。 使用前放入烘箱内，在105-115℃左右烘干40-50min。冷
（2）拖尾现象
（3）斑点形成念珠状
（4）同一块薄板上出现比移值相差悬殊
的斑点
（5）斑点比移值不稳定
（6）斑点异形
6 显色
A 光学检出法 a 自然光 b 紫外光 c 荧光 B 蒸汽显色法 C 物理显色法 D 试剂显色法
a喷雾显色
b 浸渍显色
( 通用显色剂 硫酸溶液、0.5%碘的氯仿溶液、 中性0.05%高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液)
却后使用。
固定相（吸附剂）的选择
纤维素、淀粉 硅酸镁 硫酸钙 硅胶 佛罗里硅土 氧化镁 氧化铝 对极性有机物的吸附作用增强
活性炭
2 供试品的制备：按照各药品质量标准规
定的方法进行提取分离。制得的供试品应放 置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样 量。 3 对照品溶液的制备：可按质量标准规定 精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶 中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试 品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一 定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止 造成对照品污染。
薄层色谱法
概念
薄层色谱法(TLC) 将固定相(如硅胶)薄薄地均匀涂敷在底板 (或棒)上，试样点在薄层一端，在展开罐内 展开，由于各组分在薄层上的移动距离不 同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位 置及其密度就可以完成对试样的定性、定量 分析的色谱法。
基本原理
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它 利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在 移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程 中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解 吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。
自动点样器
毛细管点样
5
展开
展开室
展开剂（流动相）的选择：主要根据样品中 各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解 度等因素来考虑。
展开剂的选择
正己烷 环己烷 四氯化碳 甲苯 氯仿 正丁醇 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 甲醇 水
溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强
在一块薄层板上进行试验： 当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先 若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极 用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大 性过强； 的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组 若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶 剂的极性过弱。 合。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大。 各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。
三用紫外仪
显色用喷雾器
举例
麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别 [处方] 麻黄31g 苦杏仁31g 生石膏157g 甘草 31g [鉴别] 供试品溶液制备：取本品10g，加水50ml使溶解， 加氨水1ml使成碱性，用乙醚提取2次，每次10ml， 合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去 乙醚，残渣加甲醇2ml，作为供试品溶液。 对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成 每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
展开系统：硅胶板；以 氯仿－甲醇－浓氨水试液 （20:5:0.5）为展开剂； 显色：茚三酮试液，在 105℃加热至斑点清晰。 显色结果：供试品溶液 中，在与对照品色谱相应 的位置上，显相同的红色 斑点。
盐酸麻黄碱
供试品
薄层色谱法
应用
1 食品和营养
2 药物和药物代谢
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
3 化学和化工
4 医学和临床 5 毒物分析和法医化学 6 农药
4 点样：按规定吸取溶液用定量点样毛细 管或色谱用微量注射器点样于薄层板上。 点样基线距底边的距离为1～2cm，点间距 一般为1.0-1.5cm。点样直径一般应小于 5mm。两个以上的点样应在同一水平线 上，并与薄层板的底边平行。点样时必须 注意勿损伤薄层表面。
供试品样
1-2cm
对照品 样
点样示意图 点样直径≤5mm 1cm≤点间距≤1.5cm
在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚 度等），化合物移动的距离和展开剂移动的 距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理 常数，其大小只与化合物本身的结构有关， 因此可以根据Rf值鉴别化合物。
比移值
组分二 组分一
被分离 混合物
薄层色谱展开示意图
薄层色谱法
优点
操作简单，定性结果直观
缺点
有一定毒性、定量方面的精密度 较差
展开剂要接触到薄 层板下沿，但切勿
接触到样点。
盖上盖子，展开。
1-2cm
观察展开情况。 取出薄层板
展开示意图
上升法
倾斜上行法
展开方式示意图
下降法
影响展开的因素 A 相对湿度的影响 B 溶剂蒸汽的影响 C 温度的影响 D 展距的影响
展开中斑点异常现象的探讨
（1）边缘效应：同一种化合物，在同一块薄层板上， 用同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的 斑点比薄层两侧边缘处的斑点的 Rf值小即为边缘效 应。 常用的解决办法： ①增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度。 ②选用较合适的单一展开剂代替混合展开剂。 ③采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂。 ④在薄层板的两边各刮去约5mm的吸附剂有助于防止 边缘效应。