外周血PBMC的分离
原理
外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

外周血
红细胞
粒细胞
单个核细胞
血小板
淋巴细胞
单核细胞
1.030~1.035
1.075~1.090 Ficoll：1.077±0.001 (PBMC)
1.092
1.093
实验步骤
注意事项
1500rpm, 20℃ , 30min
PBMC
红细胞粒细胞
Ficoll
稀释外周血 Ficoll
稀释的血浆、血小板 ⏹ 1.采血，稀释
（外周血：稀释液=1：2）
⏹ 2.在离心管中加入Ficoll ，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll ：稀释血=1：2） ⏹ 3.18℃，1500r/min ，离心30min ⏹ 4. 轻轻吸取PBMC 层移入另一试管中
⏹
5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min 离心5min ，弃上清。

⏹每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞
⏹Ficoll应适量，外周血应充分稀释
⏹温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果
⏹在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面⏹吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液
而导致血小板污染。