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番茄果实品质测定

可溶性糖含量测定(蒽酮法)
材料
仪器:分光光度计、天平、水浴锅、
大试管、三角瓶、容量瓶100ml、量筒25ml、移液管5ml一支、1ml一支、小漏斗
药品:标准葡萄糖溶液、准确城区无水葡萄糖200mg,放入200ml容量瓶中,加入蒸馏水定容,使用时稀释10倍(100ug/ml)
蒽酮试剂:称取0.1g蒽酮溶于100ml稀硫酸中(76ml浓硫酸稀释成100ml),贮于棕色瓶内,冰箱保存,可用数日。

方法
记录光密度值,绘制标准曲线。

2、样品中可溶性糖的提取称取减碎新鲜样品0.5~1g,放入三角瓶50ml中,再加入25ml 蒸馏水,放入沸水浴中煮沸20min,取出冷却,过滤入100ml容量瓶中,用热水冲洗残渣数次,定容至刻度。

在分光光度计上比色,测出光密度值,在标曲上查出相应含糖量(ug)
4、结果计算
可溶性糖含量%=【(糖含量(ug)×稀释倍数)/(样品质量×106)】×100
有机酸测定
仪器:天平、刀、研钵、漏斗、玻璃棒、水浴锅、滴定管、滤纸、移液管10ml一支,容量瓶50ml、三角瓶50ml,量筒25ml1个
药品:0.1mol/L氢氧化钠,1%酚酞,石英砂
步骤
1、城区5g番茄果肉,放入研钵中,加少许石英砂研磨成匀浆,用蒸馏水洗入50ml三角瓶中,加水约30ml,放在80°水浴锅中浸提30分钟,每隔5分钟搅拌一次。

取出冷却,过滤入50ml容量瓶中,并用蒸馏水洗残渣数次,定容至刻度,充分摇匀作测定用。

2、两区10ml样液放入50ml三角瓶中,加三滴酚酞指示剂,用0.1mol/L 氢氧化钠滴定至微红色,摇1min不褪色为终点,取3次平均值
计算结果
有机酸含量=(A×0.1×K×C)÷(W×D)×100
A滴定时消耗的氢氧化钠量,0.1=4×10-3 g/ml
K=0.67
C稀释总量
W样品质量
D测定时所取样液量ml
抗坏血酸测定(2,6-二氯酚靛酚法)
仪器 研钵、漏斗、玻璃棒、定量滤纸、滴定管、移液管、容量瓶、三角瓶 药品 2%草酸溶液:溶解20g 草酸结晶与200ml 水中,然后稀释至1000ml 。

200ml0.01% 2,6-二氯靛酚钠溶液:称区2,6-二氯靛酚钠60mg ,放入容量瓶中,加热的蒸馏水100-150ml ,滴加0.01mol/L 的氢氧化钠4-5滴,强烈震动10分钟,冷却后加水至刻度,摇匀后用精密滤纸过滤于棕色瓶内,贮于冰箱中备用。

有效期一周。

抗坏血酸标准溶液:准确称取20mg 抗坏血酸,溶于2%草酸溶液中,定容至200ml ,混匀,吸取比液10ml ,再以2%草酸溶液稀释定容至200毫升。

方法
样品处理和提取
城区适量5g 样品置研钵中,加4毫升2%草酸,研磨成匀浆,用玻璃棒将样品提取液转移到50毫升容量瓶中,残渣用草酸洗2-3次和提取液一并转入容量瓶中,最后用2%草酸定容至刻度,摇匀过滤,滤液备用。

空白的测定
吸取10ml2%草酸,放入50毫升三角瓶中,用2,6-二氯靛酚钠溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒内部褪色为止,记录所用滴定液体积(重复三次,取平均值)。

2,6-二氯靛酚钠溶液滴标定
吸取标准抗坏血酸溶液10ml ,放入50ml 三角瓶中,立即用所要标定的2,6-二氯靛酚钠溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒内不褪色,记录用滴定液体积(重复三次,取平均值)。

按下式计算K 值,K=
200G ×20010×v
10
K 为1ml2,6-二氯靛酚钠所能氧化抗坏血酸的质量,G 为称取抗坏血酸的质量V 滴定10毫升抗坏血酸溶液所用去2,6-二氯靛酚钠的体积与丁丁空白所用体积的差值。

样品测定
吸取滤液10毫升,放入50毫升三角瓶中,立即用要标定的2,6-二氯靛酚钠溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒内不褪色,记录用滴定液体积(重复三次,取平均值)。

结果与分析
X=

空样)(WV KV V V ×100
x 为100g 样品中所含维生素含量(mg/100g )w 为称取样品的质量(g );v 样为滴定样品所用的2,6-二氯靛酚钠溶液的体积(ml ),v 滤为样品测定测定时所用滤液体积(ml );V 为样品提取液稀释之总体积,K 为上k 值。

可溶性总糖的测定
仪器:分光光度计;20ml刻度试管;刻度吸管(5ml,1ml);记号笔;吸水纸适量
试剂1、蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。

2浓硫酸(比重1.84)
材料与方法
1标准曲线的制作
葡萄糖标准曲线的制作
取6支20ml试管,编号,按下表数据配置一些列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢加入5ml浓硫酸,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值,以标准葡萄糖含量为横坐标,光密度值为纵坐标,作出标准曲线。

2样品中可溶性糖的提取
称取1克样品,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中,置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml 容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。

3糖含量测定
用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水合0.5ml蒽酮试剂,再缓慢加入5ml浓硫酸(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热),盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟(比色空白用2毫升蒸馏水与0.5毫升蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟)。

冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值。

查标准曲线上得知对应的葡萄含量(ug)。

结果计算
样品含糖量(g/100g鲜重)=
考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白含量
标准蛋白质溶液(100ug/ml牛血清蛋白):称取牛血清蛋白25mg,加水溶解并定容至100ml,吸取上述溶液40ml,用蒸馏水稀释至100ml即可。

4℃下保存备用。

考马斯亮蓝G250溶液:称取100mg考马斯亮蓝G250,溶于50毫升90%乙醇中,加入100ml85%(W/V)的磷酸,再用蒸馏水定容到1000毫升,贮于棕色瓶中。

常温下可保存一个月。

材料与方法
标准曲线的绘制:取6支试管,编号后,按下表加入试剂,混合均匀后,向各管中加入5ml 考马斯亮蓝G250溶液,摇匀,并放置2min后,以0号试管为空白管凋零,在595nm下比色测定吸光度(比色应在1h内完成)。

以蛋白质含量为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制
1)样品提取:称取鲜样0.25g~0.5g,用5ml蒸馏水研磨成匀浆后,3000r/min离心10分钟,上清液备用。

2)吸取样品提取液1ml(视蛋白质含量是当稀释),放入试管中(每个样品重复2次),加入5毫升考马斯亮蓝G250溶液,摇匀,放置2分钟后,在595nm波长下比色,测定吸光度,并通过标准曲线查得蛋白质含量。

样品中蛋白质含量(mg/g)=C×V T/(V S×W F×1000)
式中C-查标准曲线值ug
V T--提取液总体积ml
W F---样品鲜重g
V S--测定时加样量ml。

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