32
标本1实际浓度
结果报告
标本最终检测结果以“精浆中性α- 葡糖苷酶
总活性”方式报告，即总活性=标本浓度
(U/L)×一次射精的精液体积 (ml)=mU/ 一次射 精
正常参考值
≥20 mU /一次射精（WHO）
33
试验中注意事项
• 严格控制禁欲时间和样本离心速度 • 操作时加样要准确，混匀充分
ENTER NUMBER OF STANDARD REPLICATES: 01
CONCN. OF STD1: 0
CONCN. OF STD2: 4.46
CONCN. OF STD3: 8.92 CONCN. OF STD4: 17.84
CONCN. OF STD5: 35.68
按“平滑曲线”方式拟合标准曲线
空白孔单孔，所有检测孔吸光度均为之相减。
30
各检测孔在微孔板上的位置排列方式如下：
1 A B C 2 B S1 S2 3 R1 R1B R2 R5 R5B R6 4 …… …… …… ……
D
E F G H
S3
S4 S5 Q QB
R2B
R3 R3B R4 R4B
R6B
R7 R7B R8 R8B
……
…… …… …… ……
Centrifugation at 2 000 r/min for 10 minutes Centrifugation at 3 500 r/min for 15 minutes
25
20 15
10
5 0 1 5 9 例数
39
49
13
17
21
25
29
33
37
41
45
•
冻融后的精浆α葡糖苷酶的检测结果
（ 43/51 ）的精浆含有精子，平均精子密度 为 (2.43±3.95)×106/ml ， 而 经 3 500 r/min离心15 min后，23.53%（12/51）的精 浆含有精子，平均精子密度为（0.22±0.87） ×106/ml，结果见图1。
38
图1
30 精子密度 (106/ml)
不同速度离心后的精浆中精子密度的比较
开始有效的自由活动，且有充分活动力，可 由阴道进入宫颈、子宫及输卵管，最后与卵 子结合而致孕。

精囊（凝固酶）和前列腺（液化因子、PSA）
在精液的凝固和液化过程中起重要作用
13

男性不育疾病中精浆生化指标的改变
凝固 液化
正常 正常 不
PH
急性>8 慢性<7 <7 >8
α-糖苷 果糖 酶
降低 正常 正常 正常 降低 正常
精液是由精子和精浆组成的混合物 精子产生于睾丸 精浆产生于附睾、前列腺、精囊腺和尿道球
腺等附属腺体

正常精液中精子占5%，精浆占95%

在精浆中约30%来自前列腺，60%来自精囊
腺，5-10%来自于附睾及尿道球腺
6
7

正常精浆应具备

精浆量≥2.0ml
外观和粘稠度都正常 PH值7.2-7.8 精浆各项生化指标正常 精液WBC＜ 1×106/ml
F
G H
Q
R1 R2
QB
R1B R2B
R8
R9 ┇
R8B ……
R9B …… ┇ ……
S：标准孔
Q：质控孔
QB：质控对照孔 R：标本测定孔
27
RB：样本对照孔
• Bio-Tek ELx800酶标仪程序设置，主要参数如下 MAPPING DIRECTION: DOWN; BLANK MAP: P-DOWN; ENTER NUMBER OF STANDARDS: 05
酸性抑制剂（ul）
蒸馏水（ul） 质控液（ul）
样本（ul） 糖苷酶抑制剂（ul） 底物（ul） 终止液（ul）
10 5
—— —— 100 1000
10 5
—— 5 100
—— ——
5 —— 100 1000
—— ——
5 5 100 1000
37℃ 预温5min，底物同时预温5min。 37℃准确反应25min。 1000
4

男性生殖腺分泌功能

睾丸:精子、雄性激素、转铁蛋白、 附睾 : 中性α-葡萄糖苷酶、肉毒碱、甘油磷酸 胆碱、唾液酸等，与精子的功能性成熟有关


精囊腺: 分泌果糖、前列腺素等，呈碱性

前列腺: 分泌酸性磷酸酶、柠檬酸、谷氨酸转
肽酶、PSA、锌、镁等，其分泌物呈酸性
5

精液的组成和来源

每管各取250ul，标准液250ul,在微孔板上按特定方法排列， 酶标仪405nm比色。
23

比色与计算
计算标准管浓度对应的标本浓度值

1单位（U）葡糖苷酶活性=37℃下每分钟产生 1umol PNP
标本系数=总孵育体积÷样本体积÷反应时间
(min) =1115÷5÷25=8.92
标准管浓度对应的标本浓度值(umol/L)=标准


糖苷酶抑制剂（冻干粉）
底物（冻干粉）
1瓶
2瓶


终止液
标准品（1~5）
50ml×1瓶
各2.5 ml


质控液
底物溶解液

100μl×1瓶
5 ml×1瓶
19

实验设备及用具

酶标仪 低速自动平衡离心机 微量水平振荡器 水浴箱 （37℃）
精密移液器（加样枪） 0.5~20ul、50~200ul、100~500ul、 200~1000ul
所有6份标本加与不加PMSF对α-葡糖苷
性检测没有影响（P >0.05）。连续20天
（隔一天检测一次）的检测结果表明，
6份标本的CV为2.22%～5.29%。见表2
40
表2 精浆样本在加入PMSF和未加入 PMSF后活性变化情况
Sampl e 1 2 3 4 5 n 10 10 10 10 10
加入PMSF α-葡萄糖苷酶(U/ml)
B：空白孔 S：标准孔
Q：质控孔
QB：质控对照孔
31
R：标本测定孔
RB：样本对照孔
• 设置酶标仪程序时，标准浓度输入值分别为0、 4.46、8.92、17.84和35.68。按“平滑曲线”方 式拟合标准曲线 • 人工计算方法：检测管实际浓度(U/L)=检测管浓
度-对照管浓度。
如：质控管实际浓度=Q－QB =R1－R1B
20.84±0.66 23.01±1.05 33.43±1.16 36.54±1.74 48.48±1.58
CV(%) 3.17 4.56 3.47 4.76 3.26
未加PMSF α-葡萄糖苷酶(U/ml) CV(%)
21.23±0.68 22.87±1.21 33.78±0.75 36.63±1.75 49.04±1.67 3.20 5.29 2.22 4.78 3.41
男科实验室开展的精浆生化项目

精浆α-葡萄糖甘酶测定 精浆果糖测定 精浆酸性磷酸酶的测定 精子顶体酶的测定 精浆锌的测定 精浆乳酸脱氢酶X同工酶的测定 精浆柠檬酸定量测定
16
二、精浆中性α-葡萄糖甘酶测定（酶法）

检测目的
主要是附睾分泌功能的指标，较左旋肉毒碱
和甘油磷酸胆碱对附睾更敏感、更特异
评价精浆α-葡糖苷酶检测中离心速度、禁欲时间、 以及冻融对精浆α-葡糖苷酶水平的影响，为精浆α-葡
糖苷酶检测实现标准化及实验室内部和实验室之间的
质量控制提供指导 • 不同速度离心后的精浆中α-葡糖苷酶水平见表1、
36
表1
精浆α-葡萄糖苷酶在精浆标本2000r/min
离心10min和3500 r/min离心15min结果比较
28 酶标仪打印输出结果，即为检测标本真实浓度（U/L）
• 优点
仪器可设置多样本空白，直接计算待检样本浓度
• 缺点
操作繁锁（对酶标仪操作技术要求较高） 浪费试剂
每次试验最好作标准曲线
29
通过人工计算检测样本浓度（适用于不能
设置多样本空白的酶标仪，如大多数普通 酶标仪）
• 酶标仪对空白处理方式有限，但可设置一个

石英定时钟
20

实验操作方法

试剂准备
糖苷酶抑制剂冻干粉以120μl蒸馏水溶解，4℃可使
用20天，分装保存-20℃可长期使用（切勿反复冻 融）
每瓶底物冻干粉以2.2ml底物溶解液充分溶解，分
装保存
溶解后的底物液，4℃保存可用5天，-20℃保存可
用数月（切勿反复冻融）
21

标本准备
记录受检者一次射精的精液总量(ml)
酸性磷 柠檬酸 酸 酶
正常 正常 升高 降低 正常 正常
降低
副 睾 疾 病 精 囊 缺 如
前列腺 疾 病
正常 不 正常
输精管 阻 塞
正常
正常
正常
降低
正常
正常
正常
14

精浆生化检验的目的

精子功能指标：评价精子受孕能力 用于男性生殖道炎症的诊断


了解副性腺功能 确定梗阻性无精子症及梗阻部位
15


精液液化后以3000g离心10分钟，保留精浆 若样本不能立即测定，可以Eppendorf管分
装精浆，-20℃保存待检
根据离心力计算离心速度公式
N Rcf *10 / 1.118 * R
5
N：离心速度
Rcf：离心力
R：离心半径
22

操作方法