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细菌的生理生化反应实验报告

细菌的生理生化反应实验报告
【实验目的】
了解细菌生理生化反应原理,掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。

【实验原理】
通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。

某些细菌产生色氨酸酶,能分解培养基蛋白胨中的色氨酸,产生吲哚,
吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应,形成红色的玫瑰吲哚,为吲哚反应阳性。

微生物发酵葡萄糖成丙酮酸,2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下与
肌酸类物质反应,生成红色化合物为.反应阳性。

有些细菌发酵糖类产生有机酸较多,使发
酵液的pH下降到以下,当加入甲基红试剂后,时发酵液变红色,为甲基红反应阳性。

某种
微生物能以某种糖类为碳源,产酸产气,则判断为发酵这种糖。

【实验材料和用具】
1.菌种:大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。

2.培养基:葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基(葡萄糖、乳糖或蔗
糖)、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂
3.仪器:酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、
杜氏小管。

【实验方法】
(一)V-P反应
1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管,分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、
普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。

空白对照不接种。

置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录去除以上培养物,分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中,加入与培养液等量的V-P试剂,充分震荡2min。

放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。

(二)甲基红实验
于V-P实验留下的培养液中,分别加入2-3滴甲基红指示剂,立即观察培养液的颜色变化(三)吲哚实验
1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管,分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变
形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。

2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。

空白对照不接种。

置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录在培养基中加入乙醚1-2ml,经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中,静置片刻后乙
醚层浮于培养液的上面,此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。

观察记录结果
(四)糖发酵试验
1.试管标记取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支,分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。

2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。

空白对照不接种。

置37度恒温培养箱中培养24-48h。

3.观察记录
【实验结果与分析】
(一)V-P
大肠产气枯草变形对照
结果—+———
产气肠杆菌结果为阳性,其余为阴性。

(二)甲基红
大肠产气枯草变形对照
结果+++——
大肠杆菌、产气肠杆菌、枯草芽孢杆菌结果为阳性,变形菌为阴性。

(三)糖发酵
大肠产气变形对照
葡萄糖颜色+—+—
是否产气+———
乳糖颜色+—+—
是否产气+———
蔗糖——+—
是否产气——+—
大肠杆菌可以利用葡萄糖和乳糖,并且产气;普通变形菌可以利用葡萄糖、乳糖和蔗糖并且在蔗糖中产气。

(四)吲哚实验
大肠产气枯草变形对照
结果+——+—
大肠杆菌和普通变形菌结果为阳性,其余为阴性。

(五)抗生素
抑菌圈大小
氯苯青霉素氯霉素卡那霉素链霉素对照
金黄-
大肠-
氯苯青霉素对两种细菌的药性最强。

抗生素对金黄葡萄球菌的药性强弱依次为氯苯青霉素、卡那霉素、氯霉素和链霉素。

而对大肠杆菌则是链霉素、氯霉素和卡那霉素、氯苯青霉素。

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