BI YE SHE JI三叶木通果皮总黄酮的提取方法研究所在学院生物与环境学院专业班级生物技术学生姓名学号指导教师职称完成日期年月日摘要三叶木通为木通科木通属的植物，本实验主要内容是乙醇回流法提取三叶木通果皮中总黄酮的条件优化，并比较与其它提取方法（甲醇提取法、搅拌提取法）的提取率，以获得提取三叶木通果皮中总黄酮的最佳方案。
实验对乙醇回流法做了乙醇的浓度（30%、35%、45%、55%、65%、80%）、料液比（1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35）、提取时间（0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.5h）、提取温度（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）四个单因素实验，并进行了四因素四水平正交实验，确定乙醇回流法最佳的因素组合是乙醇浓度为55%，料液比为1:25，提取温度为80℃，提取时间为1h，提取率是2.33%，而甲醇提取法、搅拌提取法的提取率分别为2.20%、1.08%，结果表明乙醇回流法黄酮提取率最高。
本实验结果为今后进一步开发三叶木通的药用价值提供理论基础。
关键词：三叶木通；果皮；总黄酮；乙醇回流法；甲醇提取法；搅拌提取法ABSTRACTAkebia is the genus Akebia Lardizabalaceae plants, the main content of the experimental conditions of total flavonoids in the ethanol reflux method to extract Akebia peel optimization, and compare with other extraction methods (methanol extraction,mixing of the extraction rate of extraction) to obtain the best solution of the total flavonoids extract Akebia peel. Experiments the concentration of ethanol by ethanol (30%, 35%, 45%, 55%, 65%, 80%), solid-liquid ratio (1:10,1:15,1:20,1:25 1:30,1:35), extraction time (0.5h, 1.0h, 1.5h, 2.0h, 2.5h, 3.5h), extraction temperature (40°C, 50°C, 60°C, 70°C, 80°C, 90°C) four single-factor experiments, and the four factors and four levels of orthogonal experiment to determine the best combination of factors of ethanol reflux method is the ethanol concentration of 55% solid to liquid ratio of 1:25, the extraction temperature is 80 °C, extraction 1h, the extraction rate is 2.33%, while the methanol extraction, stirring extraction, the extraction rate of 2.20%, 1.08%, the results showed that the ethanol reflux method for the extraction rate of the highest. Our results provide a theoretical basis for the further development of the medicinal value of Akebia.Key words:Akebia; Peel; Total flavonoids; Ethanol reflux method; Methanol Extraction; Stirring extraction目录1前言 (1)1.1三叶木通植物的研究现状 (1)1.2 三叶木通的利用价值 (1)1.3 黄酮的提取方法及研究现状 (2)1.4 三叶木通果皮中黄酮提取方法研究的意义 (2)2材料与方法 (3)2.1 材料 (3)2.1.1 三叶木通果皮 (3)2.1.2 主要试剂 (3)2.1.3 实验设备 (3)2.2 方法 (4)2.2.1 材料前处理 (4)2.2.2 乙醇回流法单因素试验 (4)2.2.3 乙醇回流法各因素正交实验 (5)2.2.4 黄酮的测定 (5)2.2.5 甲醇提取法 (6)2.2.6 搅拌提取法 (6)2.2.7 乙醇回流法 (6)3结果与分析 (6)3.1 芦丁标准曲线绘制 (6)3.2 不同乙醇浓度对黄酮提取率的影响 (7)3.3 不同料液比对黄酮提取率的影响 (8)3.4 不同提取温度对黄酮提取率的影响 (8)3.5 不同提取时间对黄酮提取率的影响 (9)3.6 乙醇回流法各因素正交实验结果 (9)3.7 三种提取方法的黄酮提取率比较 (11)4结论 (13)参考文献 (14)致谢 (15)1 前言1.1三叶木通植物的研究现状三叶木通（学名：Akebia trifoliata）为木通科木通属的植物，其果实是一种营养价值较高的野生水果，而且与猕猴桃并称为野生水果大王。
分布在中国南部、长江流域和西北地区。
还具有当地的俗称，如八月瓜藤（广东）、三叶拿藤（浙江）、活血藤、甜果木通、八月楂（江苏）、拿藤、爆肚拿（江西）、八月瓜（四川、山东）等[1,3]。
三叶木通为落叶木质藤本，长达10米（目前发现的数据）[1]。
茎、枝无毛，灰褐色。
三出复叶，小叶卵圆形，长宽变化很大，先端钝圆或具短尖，基部圆形，有时略呈心形，边缘浅裂或呈波状，叶柄细长，长6～8厘米，小叶3片，革质，长3～7厘米，宽2～4厘米，上面略具光泽，下面粉灰色。
春夏季开紫红色花，雌雄异花同株。
总状花序腋生，长约8～10厘米，总梗细长；雌花褐红色，生于花序基部，有花1～3朵；雄花暗紫色，较小，生于花序上端，约有20朵左右[3]。
三叶木通果营养价值较高，其成熟于秋季，果实肉质，浆果状，长圆筒形，长约8厘米，直径4厘米左右，紫红色，果皮厚，果肉多汁，8～9月成熟后沿腹缝线开裂，故称八月炸或八月瓜，味甜可食；种子多数，呈椭圆形，棕色，长数毫米，是中药，称预知子。
果实较大，重150-500g，果肾型，果面紫红色或明黄色，非常美观。
果肉乳白透明，肉质细嫩，浓甜可口，香气迷人，富含蛋白质、氨基酸、淀粉、可溶性糖及矿质元素，还含有各类维生素，如维生素B1、B2、B6 等[2]。
此外，三叶木通果实可鲜食或酿酒、制饮料。
三叶木通种子中含有36.84%的油脂，人体必需的脂肪酸亚油酸含量高达22.64 %[1-3]，榨出的油中含有VB、VC、及VE 等[2]，且色清味香。
1.2 三叶木通的利用价值木通果肉除直接食用外还可用于制醋或加工成果汁、果冻、果脯、饮料等保健食品。
种子占鲜果重9％左右，除加工入药外，还可榨油制皂。
三叶木通全株均可入药。
根茎中富含齐墩果酸、皂甙、鼠李糖苷、豆甾醇、p-谷甾醇等药用物质。
茎藤入药，有解毒利尿，行水泻火，舒经活络及安胎之效；果实入药，能疏肝健脾，和胃顺气，生津止渴，并有抗癌作用；根入药能补虚、止痛、止咳、调经。
豆甾醇，是一种具有高营养价值、生理活性强等特点的物质，在医药、化妆品、动物生长剂及纸张加工、印刷、纺织、食品等领域有着广泛用途。
p-谷甾醇是一种植物固醇，多个在体和离体实验已证实p-谷甾醇对结肠癌、前列腺癌和乳腺癌有保护作用。
白桦脂醇、齐墩果酸及衍生物，这些元素对人体肝器官有很好的保护作用，如白桦脂醇对酒精性肝损伤有治疗作用，齐墩果酸对CCl4引起的急性、慢性肝损伤有保护作用[1,5]。
黄酮类化合物，黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，它也是一种很强的抗氧剂，可除去体内多余的氧自由基，其抗氧能力是维生素E的10倍以上[4]，所以能阻止细胞的退化、衰老，也可组织癌症的发生。
1.3 黄酮的提取方法及研究现状黄酮类化合物分布广泛，具有多种生物活性：心血管系统活性，抗菌及抗病毒活性，抗肿瘤活性，抗氧化自由基活性，抗炎、镇痛活性，保肝活性；此外，大量研究表明黄酮类化合物还具有降压、降血脂、抗衰老、提高机体免疫力、泻下、镇咳、祛痰、解痉及抗变态等药理活性[2-4]。
所以黄酮类化合物早在医疗保健方面得以广泛应用。
目前根据不同种类的植物提取黄酮类化合物的常见方法有：大孔吸附树脂分离法[6]、水提取法[7]、醇提取法[8-12]、酶解提取法[13-15]。
再根据不同的黄酮类化合物特有的化学特性，在实际的操作中有些方法还可分，如醇提取法可分为乙醇搅拌法和乙醇回流法，而酶解提取法，则需要在实际的提取过程中根据酶解物进行选择。
1.4 三叶木通果皮中黄酮提取方法研究的意义黄酮类化合物广泛存在于各种药用植物中，是许多中草药的活性成分。
由于其药用价值高，所以如果能广泛的从药用植物中提取得到，将为医疗事业带来新的前景。
而许多药用植物中对于黄酮的提取都需要经过相当复杂或是昂贵的提取方式才能得到一定量的黄酮物质，很难满足医疗等行业的应用需求。
三叶木通是一中经济价值高的野生植物，其果实也是家喻户晓的可口水果，然而其占重质量69.1%的果皮却常常被忽视，根据相关的研究表明，其果皮中含有丰富的黄酮类物质。
本身三叶木通植物分布广泛，果实果皮材料来源丰富，所以若能研究出一种经济效益高的提取方法来提取其中的黄酮物质，将为工业、医药业等领域带来新的锲机。
2 材料与方法2.1 材料2.1.1 三叶木通果皮实验中所用果皮材料为宁波市郊区的农家果园三叶木通植株的果实果皮。
2.1.2 主要试剂主要试剂有1%纤维素酶液，50%乙醇溶液，5% NaNO2 ，4% NaOH，10% Al(NO3)3 ，65%甲醇溶液。
试剂制备：1%纤维素酶液，用电子天平准确称取纤维素酶粉末0.25g，然后迅速移至25 ml 容量瓶中，并加入蒸馏水至刻度线，摇匀后放于冰箱备用。
50%乙醇溶液，用大烧杯量取250 mL 无水乙醇于500 mL 容量瓶中，然后加入蒸馏水定容至刻度线，摇匀备用。