方案第1版顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B含量的验证＊＊＊＊药业有限公司＊＊＊＊有限公司方法验证生效日期：编写人：日期：审阅人：日期：批准人：日期：QA经理＊＊＊＊有限公司方法验证目录名称页数1．目的··32．范围··33．仪器与试剂及色谱条件··34．验证实验内容··45．最终报告··20＊＊＊＊有限公司方法验证一、目的1.验证顶空气相色谱法能否准确、精密的测定一定浓度范围内的原料药中溶剂A和溶剂B的含量。
2.验证顶空气相色谱法测定原料药中溶剂A和溶剂B含量是否具有良好的选择性。
3.验证方法在环境、条件发生一定变化时，能否有一定的耐受性。
二、范围适用于＊＊＊＊药业有限公司原料药中溶剂A和溶剂B含量的验证，包括：空白试验、精密度、定量限、线性范围、准确度、耐受性等。
三、仪器与试剂及色谱条件仪器与试剂GC —HP6890N（FID）Column：DB-1301（30m×0.32mmI.D.×1μm）Oven：90℃Inlet：150℃Detector: 200℃Column Pressure:4.8psiColumn flow rate: 0.8ml/minSplit rate: 1:25Sampler Condition:＊＊＊＊有限公司方法验证Agilent 7694 Head-space SamplerEquilibration temperature: 80℃Equilibration time: 45minTransfer-line temperature: 105℃Carrier gas: 25ml/minPressurisation time: 0.5minInjection time: 0.20min移液管：25 ml，10ml，2ml 吸量管：2ml 胶头滴管分析天平顶空瓶（22ml），容量瓶：50ml微量注射器：25μl试剂：DMF（AR）、溶剂B（AR）、溶剂A（AR）、原料药（批号）无残溶的原料药四、验证实验内容1. 空白试验（1）DMF用称液管移取2mlDMF于22ml顶空瓶中，加盖，作色谱处理。
可接受标准：在溶剂B和溶剂A出峰位置处无干扰峰验证结果：结论：操作者：核对者：＊＊＊＊有限公司方法验证（2）空白取无残留溶媒（在水相结晶，不用溶媒处理）的普青_____g于22ml顶空瓶中，用移液管加入2mlDMF，加盖，摇匀，作色谱分析。
可接受标准：在溶剂B和溶剂A出峰位置处无干扰峰。
验证结果：结论：操作者：核对者：2. 精密度2.1 系统适应性溶液配制贮备液：向50ml容量瓶中精确加入溶剂B0.05g，溶剂A0.5g，用DMF定容。
标准溶液A：称取贮备液1.2800g于50ml容量瓶中，用DMF溶液定容。
精密称1.0g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml标准溶液A,加盖作色谱处理，各重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
可接受标准：RSD≤5％验证结果：1.贮备液配制：称取溶剂B g,溶剂A g，用DMF定容至50ml。
2.标准溶液A:称取贮备液g于50 ml容量瓶中,用DMF溶液定容.3.称取无残留的原料药, , , ,于22ml顶空瓶中，加入2 ml标准溶液A,加盖作色谱处理。
＊＊＊＊有限公司方法验证标准溶液A色谱数据表结论：操作者: 核对者:3. 线性范围：3.1 线性标准溶液配制：贮备液a:用移液管移取10ml贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
1＃标准液：用吸量管移取1.25ml贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成1＃贮备液。
然后精密称g无残留的原料药于22 ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含500ppm溶剂A及50ppm溶剂B）。
2＃标准液：用移液管移取25ml1＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成2＃贮备液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含250ppm溶剂A及25ppm溶剂B）。
3＃标准液：用移液管移取25ml2＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成3＃贮备液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含125ppm溶剂A及12.5ppm溶剂B）。
＊＊＊＊有限公司方法验证4＃标准液：用移液管移取25ml3＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成4＃贮备液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含62.5ppm溶剂A及6.25ppm溶剂B）。
5＃标准液：用移液管移取25ml4＃贮备液于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀，制成5＃贮备液。
然后精密称g无残留的原料药于22ml顶空瓶中，加入2ml上述溶液，混匀。
（约含31.3ppm溶剂A及3.13ppm溶剂B）。
分别取1＃、2＃、3＃、4＃、5＃线性标准液，加盖作色谱处理。
按照线性标准液1＃～5＃的浓度与其对应的溶剂B及溶剂A的峰面积，作线性回归得到溶剂B和溶剂A的工作曲线。
可接受标准：γ≥0.99线性范围数据表＊＊＊＊有限公司方法验证溶剂A线性回归结果：a＝b＝r＝工作曲线：y ＝溶剂B线性回归结果：a＝b＝r＝工作曲线：y ＝结论：操作者：核对者：4. 定量限3#贮备液逐级稀释，作色谱分析，按照色谱峰的信噪比为1：10时的浓度作为溶剂A 和溶剂B的定量限。
结论：溶剂B的定量限：溶剂A的定量限：操作者：核对者：＊＊＊＊有限公司方法验证5. 准确度5.1 系统适用性a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，各重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
可接受标准：RSD≤5％结论：5.2 准确度称取1.0g 普鲁卡因青毒素产品，测出其溶剂B 和溶剂A 的残留量，然后加入一定量的标准溶液，加入三次, ,计算其回收率，可接受标准：回收率应在90％～110％之间。
验证结果： 5.2.1溶剂B 回收率称取原料药产品 g 于22ml 顶空瓶中，加入2mlDMF 溶液作色谱处理，根据工作曲线计算出该批产品中的溶剂B 和溶剂A 的含量。
＊＊＊＊有 限 公 司方 法 验 证称取原料药产品1.0g 于22ml 顶空瓶中，加入2mlDMF 及10μl,20μl,25μl 的贮备液a ，加盖作色谱处理，根据工作曲线计算溶剂B 和溶剂A 的含量。
溶剂B 回收率：溶剂A回收率：结论:操作者：核对者：＊＊＊＊有限公司方法验证6. 中间精密度对同一样品进行三次平行测定，连续测定三天（三天均用同一个标准品和检品），由不同人测定。
可接受标准：当天测定结果的RSD 溶剂B≤20％；溶剂A≤15％大与天之间的测定结果RSD：溶剂B≤30％；溶剂A≤20％6.1 系统适用性（第一天）溶液配制：a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
C:分别称原料药批g, g, g于22 ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.可接受标准：RSD≤5％＊＊＊＊有限公司方法验证结论：操作人：核对者：6.2 系统适用性（第二天）溶液配制：a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
C:分别称原料药批g, g, g于22 ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.可接受标准：RSD≤5％＊＊＊＊有限公司方法验证结论：操作人：核对人：6.3 系统适用性（第三天）溶液配制：a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
C:分别称原料药批g, g, g于22 ml顶空瓶中,加入2mlDMF,混匀,加盖作色普处理,根据工作曲线计算出该批产品中溶剂A和溶剂B含量.可接受标准：RSD≤5％＊＊＊＊有限公司方法验证结论：操作人：核对人：三天验证结果统计结论：操作人： 核对人： 7. 耐受性对比如下条件的测量结果： a 不同柱温的耐受性b 不同流速的耐受性可接受标准： RSD ≤5％＊＊＊＊ 有限 公 司方 法 验 证7.1 使用不同柱温的耐受性 7.1.1 第一种柱温 T = 88℃ 系统精密度a ：称取贮备液 g 于50ml 容量瓶中，用DMF 定容，摇匀。
b ：取a 液2ml 于22ml 顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
结论：操作人：核对人：7.1.2 第二种柱温T＝90℃＊＊＊＊有限公司方法验证系统精密度a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
结论：操作人：核对人：7.1.3 第三种柱温T＝92℃系统精密度a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
＊＊＊＊有限公司方法验证结论：操作人：核对人：7.1.4 对比分析7.1.5结论：7.2 不同流速的耐受性7.2.1 第一种流速0.7ml/min系统精密度a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
＊＊＊＊有限公司方法验证系统精密度结论：操作人：核对人：7.2.2 第二种流速0.8ml/min系统精密度a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
＊＊＊＊有限公司方法验证结论：操作人：核对人：7.2.3 第三种流速0.9ml/min系统精密度a：称取贮备液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，摇匀。
b：取a液2ml于22ml顶空瓶中，加盖作色谱处理，共重复4次，计算4次的平均值，相对标准偏差。
＊＊＊＊有限公司方法验证系统精密度结论：操作人：核对人：7.2.4对比分析：7.2.5结论：五. 最终报告＊＊＊＊有限公司方法验证续前页:。