• 它是目前用于缺失型DMD诊断最简便最有效
的方法,已成为D/BMD患者基因诊断及产前 基因诊断的首选技术,而且此技术可根据检 出缺失外显子是整码还是移码来判断患者 的预后。
DMD---分子遗传及突变情况
• DMD 患者约3 0 % 为自发性突变，其余的
为X染色体隐性遗传。在各种类型突变中， 单个或多个外显子缺失突变患者占65% － 70%；无意义或框移造成的点突变占30%， 重复占5% － 15%：故DMD 突变类型主要 为缺失，其特点是Xp21 上外显子缺失的不 均一性。
首先应进行家系成员21号染色体上STR标记
的分析。 该项检测具备的优点:一是检测21三体
综合征,因为在二次生育时孕妇年龄普遍偏
产前诊断--策略
• 确定胎儿性别
如胎儿为男性,则应针对先证者的基因突变或多 态性标记进行分析,确定胎儿是否获得突变等位基 因;如为女性,则可停止基因诊断,因为女性杂合子 通常不患病。
DMD---遗传方式及特征
DMD---遗传方式及特征
• （1）系谱中常常只有男性患者 • （2）父母都无病时，女儿则不会发病，儿子可能
发病；
• （3）由于交叉遗传，患者的同胞、舅舅、姨表兄
弟、外甥常常为本病患者；
• （4）由于男性患者的子女都正常，故可见隔代遗
传；
• （5）女性患者的父亲一定是患者,母亲一定是携带
DMD---实验室诊断
• 细胞遗传学检查 • 生物化学检查 • 基因诊断
DMD---实验室诊断
染色体检查（X ,Y）
• X染色质检查 X染色质的检查可刮取口腔
粘膜、阴道粘膜脱落上皮细胞，亦可采用 绒毛或羊水中胎儿脱落细胞涂片，经硫堇 或甲苯胺蓝染色，在光镜下计数X染色质 数目。
• Y染色质检查 Y染色质检查适用于具有一
杜氏肌营养不良症课件
DMD---临床表现
• 杜氏肌营养不良(DMD)属于X 连锁隐性遗传病，是
男性中常见的遗传性疾病。发病率约为1/3 500 活男婴，女性多为致病基因携带者，发病者罕见， 且症状较轻。D M D 发病年龄偏小，起病隐袭， 病程长，在男患中症状较重，且病死率高，患者 常常以肌肉的进行性萎缩无力并伴有腓肠肌假性 肥大为特征，多在3,5岁发病，病程进展快，大多 在20岁左右死于心肺衰竭。患儿由卧到站立有特 殊的过程（Gower征），走路为鸭型步态。
(2)早期诊断:如胎儿受累,处理比较方便(夫 妇的知情选择),而且万一取材失败或分析 中出现问题,还可在稍后时间取羊水;采集
产前诊断--策略
由于基因突变情况复杂,产前诊断前要进行
先证者预分析,以确定其基因突变细节及父 母基因多态性标记是否提供了杂合状态的 信息,以确定在该家系中实行产前诊断的途 径和策略。
前概率
1/2
1/2
条件概率 1/3
1
联合概率 1/2×1/3 1/2
后概率
1/4
3/4
DMD家系图谱
产前诊断--时机
产前诊断有2个时间窗口:首选10~12孕周采集 绒毛;次选为15~18孕周采集羊水。选择绒 毛进行产前诊断的理由有3条
:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突变
为主,母源污染将导致诊断错误,发生血性 羊水时若不经培养则直接导致诊断错误,而 绒毛则可通过形态检查准确挑选。
者。
• 注：在XR病中，男性的致病基因只能从母亲传来，
将来只能传给女儿，不存在从男性向男性传递。 即父传女，母传子，称为交叉遗传
DMD---分子遗传及突变情况
D M D 由抗肌萎缩蛋白（Dys）基因突 变所致，属于进 行性肌营养不良症常见类型。 已证实人类抗肌萎缩蛋白基因定位于X 染色 体短臂上(Xp21.1 － 3)，基因全长约2 220kb， 含79 个外显子，cDNA 长14kb，是目前已知 的最大人类基因。
DMD--产前基因诊断方法
• 多重PCR • STR-PCR • 探针连接多重扩增(MLPA) • 变性高效液相色谱(DHPLC) • 抗肌萎缩蛋白的免疫组化
产前诊断--缺失型突变检测方法 多重PCR
• DMD是以缺失型突变占基因的突变55%~65%,
主要分布5′端和中央2个缺失热点区,在对 其缺失突变热点区进行基因检测时,可检出 至少一半患者。
间接 诊断
• 多态性连锁分析（RFLP) • 变性梯度凝胶电泳（DGGE) • 单链构象多态性分析（SSCP） • DNA芯片(DNA chip)
DMD---风险估计
DMD为XR遗传病 女性携带者中约有1/3血清肌酐正常 Ⅱ—2为携带者，核型XAXa
假设
Ⅲ-1核型 为XAXa
Ⅲ-1核型 为XAXA
DMD---分子遗传及突变情况
• Dys 和抗肌萎缩蛋白聚糖等蛋白装配在一起形成
抗肌萎缩蛋白的结合蛋白复合物(DAPC)。DAPC 形成了一个穿过肌膜传递信号，连接细胞外基质 和细胞内肌动蛋白骨架的重要结构。
• Dys 基因表达的缺乏会影响DAPC 的形成，使分
子桥中断，至少导致两个结果：第一，细胞膜变 得更脆弱在肌肉离心性收缩的时候会被机械力破 坏；第二，框架蛋白，尤其是对机械力敏感的离 子通道将会失调。这就是导致疾病的发生机制。
个或一个以上Y染色体的个体或细胞群 。
DMD---实验室诊断
生物化学诊断 可对血清酶和蛋白质进行定性和定量分析。血清肌
酸激酶（CK）含量在血清酶学检查中最有 价值。
DMD---实验室诊断
• 基因诊断
直接 诊断
• 限制性内切酶片段长度多态性(RFLP) • 分子杂交：点印迹 (dot blot) • 斑点杂交(dot and slot hybridization) • 等位基因特异性寡核苷酸杂交(ASO ) • Southern印迹法(Southern blot) • Northern印迹法(Northern blot) • Western印迹法(Western blot) • 聚合酶链反应（PCR）
DMD---临床治疗
• 药物治疗：糖皮质激素治疗是目前唯一被
循证医学证实有效，可延缓DMD病程的药 物。短期口服激素治疗可增强骨骼肌力量 和功能，并可能在更长时间内稳定骨骼肌 力量和功能。
• 基因治疗：利用不直接引起人类疾病，免
疫原性较小的腺相关病毒（AAV）为载体， 导入人工剪裁的Dys基因。
• 康复治疗、矫形治疗、社会心理治疗等。