子 或完全正常 的情 况下 ， 常等位 基 因才会扩 增 出来。根据 扩 正
Hale Waihona Puke 变。根 据临床表现又将其分为静止 型（ －
、 ｔｏ ｔ、 Ⅸ’／ｔ ） 标准 型 ｃ ｃ
（－ｏ ｔ 一 、 ０ Ｏ、（ ｃ ） 血 红 蛋 白 ｝病 （－Ｏ 、－一 一 ｔ、 Ⅸ 仅 ／ ｃ 【Ｌ ｚ ￣ 、 一／ ｛ 一 ｔ 一 ／ ／
莫 宗平 喻 长顺 胡朝 晖 冯文 莉
仅 ／ｍ 合并 ８珠蛋 白基 因异 常 ， ｃ 同时成功的对该家 系的其 他成员做 出了相应 的突变类型诊 断。该方法 由于存在费 时费力
Ｏ地 中海贫血 是世 界上 最常见 的血 液 系统 遗传 病之 一 ， ｔ 该
疾 病是 由于 珠蛋 白的基 因缺 失或功 能障碍 ， 导致 ｅ 珠蛋 白肽 ｔ
增 片段 大小此法能很好 地 区分正 常杂合 子和 纯合 子个体 ， 用 可
于检 测 基 因 的 大 片 段 缺 失 。段 山 等 应 用 此 技 术 成 功 的 区 分
了一 、 【 、 三种 常见缺 失 突变 。ｕｕ等 一 。 ０ 。运用 此 技术 分 三管多重 Ｇ ｐＰ Ｒ成功 的检测 了一 ， ０ ， ＭＤ 一 Ｉ， ＴＡ， ａ．Ｃ ． 【 （ ） 一 Ｅ ， Ｆ 一 ＨＩ Ｌ
） Ｈ ａｔ 肿胎儿综合征 （－一） 与 ｂＢ ｒ水 一 一 四类。其 中症 状最 重的 为 ／ ＨｂＢ ｒ水肿胎 儿综合征 ， ａ ｔ 患儿通 常不 能存活 。其 次为血 红蛋 白 Ｈ病 （ Ｈ） 其 临床表现 往往轻 重不一 ， 常非缺 失 型 Ｈ Ｈ Ｈｂ ， 通 ｂ 患者 的临床表现往 往 比缺失 型 Ｈ Ｈ 患者 更 为严重 。 由于 目前 ｂ
结果 可靠 ， 稳定性 高。不失 为一种 Ｐ Ｒ诊断方法 的补充或佐证 ， Ｃ
必要 时可作 为 Ｐ Ｒ诊 断的确认手段 。 Ｃ ２ ．多重 Ｐ Ｒ结合 溶解 曲线分 析 ： 技术 运用 双链 Ｄ Ａ能 Ｃ 该 Ｎ 特异结合荧光染料 Ｓ ＲＧ ｅｎＩ以及不 同双链 Ｄ Ａ具 有不 同的 Ｂ ．ｒｅ Ｎ 解链 温度 的特点 。Ｍ ｎｏ ｇｅ ｕ ｋｎｄ ｅ等 。 运 用此 技术 将 Ｐ Ｒ引物分 。 Ｃ 别设计在断裂点 的侧翼 以及 断裂 点的内部 （ 扩增 和 ０ ） 【 经单 ２ 管多重 Ｐ Ｒ后产物行溶解 曲线 分析 ， Ｃ 结果显示 ＿ ｍ 、 Ｓ 、 与 － 一Ｅ Ｔ Ａ ０ Ｌ ２的溶解温度分别 为 （９ ９±０２ ℃、 ８ ． ０ ５ ｏ （２ ８± ７． ． ） （ ９４± ． ）Ｃ、 ９ ． ０ ２ ｏ （５ ０± ． ） ， ． ）Ｃ、８ ． ０ ２ ℃ 各地 中海 贫血 基 因型 特定 的溶解 温度 之间无交叉 ， 成功的鉴定 了各缺失 型。该 方法具有 简捷 ， 快速的
特点 ， 由于整个 反应过程均是在闭 盖的情况下进行 ， 且 降低 了污
染 。同时该技术可检测单碱基 的突变 、 小片段插入或者缺失 。 ３ ．缺 口 Ｐ Ｒ（ ａ —Ｃ 结 合片 段大 小分析 ： ａ —Ｃ Ｃ Ｇ ｐＰ Ｒ） Ｇ ｐＰ Ｒ最 早
由中国台湾学者 Ｃ ａｇ等 建立 。其 原理 为 ： ｈｎ 设计 引物 和缺 失 序列的两侧翼序列互补 ， 由于 基 因的缺失 突变使 本来 正 常相 距遥远位于断裂点两 侧翼 较远 的引物 变得很 近 ， 以至 于能扩 增 出特定长度的片段 ； 另外一对 引物则位于 缺失 区域 ， 这样在杂 合
中华 临 床 医师 杂 志 （ 电子 版 ）０ ２年 ２月第 ６卷第 ３期 ２１
Ｃ ｉ Ｃｉｉａ ｓＥｅｔ ｎｃＥ ｉｏ ）Ｆ ｂｕｒ ， １ ， ０． ， ｏ３ ｈｎＪ ｌ ｃ ｎ（ ｌｃ ｏｉ ｄｔ ｎ ，ｅｒａｙ１２ ２ Ｖ Ｊ６ Ｎ ． ｎｉ ｒ ｉ ０
・
综 述
・
Ｃ 地 中海 贫 血 的 基 因诊 断 ： ｔ 疗法
人 类的 ０珠蛋 白基 因位 于第 ｌ 【 ６号染 色体 短臂 末端 的 仅珠 蛋 白基 因簇 中 ， 该基 因簇包 括 ２个重 复的 ｏ基 因（ 【 仪 ） 一 ｔ ０ ２和 １ 、 个胚胎 期类 基因 （ ） 三个假基 因（ １ ｃ Ｏ ｔ） 一个功 、 、 、 ｏ 和 １ 能未 名 的 Ｏ 。其 排 列顺 序 为 ５一 一 １ １ ‘ 一 ２ ．ｘ一 一１０－ ｔ ｌ以 ｄ ．１３。 ￣ （
链 合成减少或不合 成 引 起 。该 病 高发 于 从 地 中海 沿岸 的意 大 利、 希腊 、 马耳他 、 塞浦 路斯 到东南 亚各 国 的广 大 地 区。我 国南
方 也是本病的高发地 区Ｌ 。 】
及需使用放射 同位 素的缺 点 ， 虽然 近年来 已用 非放射 性物质 取
代放射性 同位 素 ， 因该 方法 不 经过 靶 片段 的扩 增 ， 以需 要 但 所 Ｄ Ａ量较大。因而限制了其在常规诊断 中的应用 。同时 因该 法 Ｎ
根据分 子缺陷可将其分 为 ： 因大 片段 的缺失 型 地 中海 贫血 基
和少数几个 核苷 酸的插入与缺失或单 个碱 基替换 的非缺失 型 地 中海贫血两 大类。而就一 个单倍 体而 言 ， 根据 珠 蛋 白合成 减少 的程度 ， ｄ地 中海 贫 血可 为两 类缺 陷 ： １ 地 中海贫 血 １ （） （ 地 中海贫 血） 特 点为缺 失两个 ｔ 因（ ） ｄ珠 蛋 白肽链 。 ， Ｘ基 一／ ， 合成完全受 阻 ； 地中海贫 血基 因具有 明显 的种族 与地 理分 布 。 特征 ， 国最 常见 的为 一 极 少见 一 Ｈ 而＿ Ｉ 我 瓠， Ｔ ， ＿Ｌ Ｆ 则更 罕见 ； ２ ｏ （ ）ｌ 地 中海贫 ２ Ｏ （ｔ 中海贫血 ） 缺失 一个 ０基 因或一个 ０基 因发 地 ， 【 【 生点 突变或 少数几 个碱 基 的缺失 或插 入引起 （ａ 、 ．／ ） 表 现 ， 为 Ｏ珠蛋 白肽链合成 部分受 阻 。我 国最常见 的 地 中海贫 血 ｔ 基 因为－ 、 缺失 型 突 变 以及 Ｈ Ｓ Ｈ Ｓ ＨｂＷＳ点 突 一 ｂＣ 、 ｂＱ 、