（GB2760-2011）
着色剂
柠檬黄
日落黄 苋菜红
最大使用量（g/kg）
亮蓝
0.1 0.1 0.05 0.025
一、实验原理
1.聚酰胺吸附法提取合成着色剂
聚酰胺（尼龙）通过氢键吸附着色剂，天 然着色剂（影响测定）在酸性条件下被洗脱去 除，合成着色剂在碱性条件下被洗脱收集，浓 缩后上机测定。
吸附——洗涤——解吸附——浓缩——上机 理化测定一般步骤：除杂质、收集目标物、 调整浓度、上机
收集滤液，80℃水浴至2mL
乙酸调PH至6，离心管定容至5mL，冰箱保存
6. 上机测定 3000rpm离心5min，取上层10μL进高效液相色谱。
7. 结果分析 （1）保留时间
（2）含量计算
X——试样中着色剂含量（g/kg） V2——进样体积（mL） m——试样质量（g）
A——样液中着色剂含量（μg） V1——试样稀释总机体（mL） 结果保留两位有效数字
食品中合成着色剂的测定
——色素提取
2012.4.18
课程目的：
1. 掌握食品中合成着色剂的测定原理；
2. 了解高效液相色谱的工作原理及操作方法。
着色剂：通过使食品着色后改善其感官性状，增进食欲的 一类物质。
天然着色剂：辣椒红、甜菜红、红曲米、胭脂虫红、高粱 红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可 可色素、焦糖色素等等。
2. 色素吸附 称取聚酰胺3g，用少许PH4的水（70℃）调成糊状，加入待 测样品，搅拌5min。
3. 除杂质 组装好G3漏斗，将样品倒入漏斗，抽滤； PH4的水（70℃）洗涤3次，每次20mL（洗涤沉淀物）； 甲醇-甲酸洗涤3次，每次20mL（洗涤天然色素）； 400mL PH4的水洗涤。 4. 解吸附 更换抽滤瓶。用乙醇-氨水-水溶液洗涤三次（5mL、10mL、 5mL），收集解吸液。 5. 样品浓缩 解吸液倒入蒸发皿中，80℃水浴蒸发至约2mL，以乙酸 （一小滴）调节PH至6。收集样品至玻璃离心管，加水定容至 5mL。
无水乙醇-氨水-水
乙酸铵溶液 合成着色剂标准溶 液 50%乙醇 其他
70mL乙醇+20mL氨水+10mL水 解吸附
乙酸、甲醇、氨水、蒸馏水水
二、试剂与器材
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子天平、水浴锅
三、实验步骤
1. 取样、脱气 称取饮料20g，倒入50mL烧杯，碳酸饮料用电炉加热除去 二氧化碳。（已脱气）。
二、试剂与器材
试剂
聚酰胺粉 柠檬酸溶液 20g柠檬酸，100mL水溶解 PH 4的水（70℃） 水+柠檬酸溶液，调至PH=4， 加热 甲醇-甲酸溶液 60mL甲醇+40mL甲酸 1.54g乙酸铵，纯水定容至 1000mL，乙酸调PH至4 浓度0.05mg/mL
配方
作用
吸附 调PH 洗涤 洗涤 流动相 定量分析 定容样品
2. 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的 一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。 检测器：二极管阵列检测器
3.结果分析 保留时间（定性）：根据样品中各物质被 洗脱至检测器的时间差异来进行定性分析； 峰面积（定量）：根据样品峰面积与标准 品峰面积的比较来进行定量分析。
合成色素：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、 甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋 菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI 我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标 准（PH4水，糊状
20g饮料
加热脱气
混合搅拌5min
G3漏斗抽滤 抽滤过程注意 搅拌、倒废液 70℃ PH4水，20mL，洗3次 甲醇-甲酸，20mL，洗3次 70℃ PH4水，400mL洗涤
目标物
更换抽滤瓶 乙醇-氨水-水，洗三次，5ml、10mL、5mL 清洗漏斗：自来水-盐酸-蒸馏水
现状：超量使用，使用工业色素、染料色素
方便、快速、准确地检测食品中合成着色 剂，是对其进行有效管理的必要手段。
测定手段（GB/T 5009.35-2003）： 1. 高效液相色谱法 2. 薄层色谱法 3. 示波极谱法
4. 其他：纸上层析、分光光度法
苋菜红、亮蓝、柠檬黄、日落黄
合成着色剂在饮料中的最大使用量