仪器操作手册本手册根据标准配置的CyFlow® Space编写而成，具体内容根据实际配置可能有所偏差，手册内容应以实际配置为准。

CyFlow Space 仪器操作手册内容CyFlow Space介绍 (4)典型分析步骤 (5)基本操作 (6)启动CyFlow Space (6)多激光测量 (7)开始检测 (8)关闭CyFlow (9)液量绝对计数（定量）----概述 (10)如何执行液量绝对计数 (12)光路几何示意图 (13)光路图标准设置----参数 (14)仪器设置 (15)参数设置对话框：脉冲信号高度、面积和宽度 (16)触发 (17)光电倍增管（PMT）电压，增益和对数放大 (18)样本进样速度 (19)阈值：L-L（低值）和U-L（高值） (20)附录 (21)安装要求 (21)仪器安装--概要 (22)仪器安装--顺序 (23)流动室精细校准 (24)流动室 (25)维护和服务 (26)运输和储存 (26)污染物处理 (26)安全使用激光器的说明 (27)CyFlow Space技术规格表 (28)Partec推荐使用体外诊断试剂IVDPartec CyFlow Space型流式细胞仪符合欧洲98/97/EC标准，已经取得欧洲CE认证。

○C2007 Partec GmbHOtto-Hahn-Str.32D-48161GermanyCyFlow® Space介绍Partec CyFlow® Space是什么？CyFlow®Space有哪些用途？本手册涉及内容？其他要用到的说明书？操作CyFlow®Space前应该具备哪些知识？Partec CyFlow®Space是一台配臵全面的桌面式/便携式流式细胞仪（FCM）。

它的特色即设计理念是可以配备3个激光光源，和1至9个光学通道（参数），通过简单地更换光学滤片或镜片可以满足任何实验的需求。

CyFlow®Space在台式电脑或笔记本电脑下运行，数据采集、仪器控制和数据分析均由FloMax®软件控制并执行。

CyFlow® Space免费配套软件，提供常规的自动化操作，并能灵活应用在任何流式细胞术的各种研究过程中。

这些用途包括：●免疫分型的常规和科研应用●血细胞分析、HIV监测●白细胞计数、比例分析●微生物分析●发酵控制●浓度分析＋绝对计数定量分析●细胞大小和荧光分布分析CyFlow®Space仪器操作说明书包括CyFlow ®Space仪器的基本操作和维护。

但不包含与软件相关的细节，不同仪器的配套软件的使用方法也不同。

FlowMax®–数据获取和仪器控制，涉及仪器控制和多参数数据获取。

FlowMax®–数据分析，涉及在线和离线数据分析的各个方面。

用途注解、指导和维修手册–用于学习起步，包括如何达到最佳结果的提示。

阅读本手册将使您掌握了流式细胞仪的基本知识。

但最好有熟练的流式细胞仪操作人员在旁随时辅助您。

另外，从流式细胞仪的基本书籍中也可获得帮助。

（例如：Howard M. Shapiro, Practical Flow Cytometry. Wiley 2002）Partec 分析过程的典型步骤1. 细胞在悬浮液中通过不同的荧光标记染色而被分离。

2. 激光器发出来的光照到细胞表面，细胞被照射后散射出荧光和散射光。

3. 荧光信号显示在直方图和散点图中，并在每个图中进行分析。

1. 制备和染色对于流式细胞仪分析，细胞必须在悬浮液中彼此离散。

一般，如果他们自身不能产生足够的光信号，则需要一种或更多荧光染色剂对其标记，荧光分子被目标细胞物质吸收，如CD4-,CD45-抗体与白细胞表面抗原结合。

荧光染料结合率与细胞表面抗原的多少成正比。

充分准备适合的试剂是准确分析的必要条件。

通过检查荧光显微镜的染色情况可以解决准备过程中出现的问题。

2. 流式细胞仪分析细胞逐一经过流动室时，单独接受激光的照射。

由于激发效应，荧光分子发出有独特波长的荧光（发射波长谱）。

通过滤光片，该荧光束分解成不同波长范围范围。

针对细胞个体分析其波长范围的强度。

除荧光外，还同时测量每个细胞的物理光强度。

散射光在光源前向角（FSC）和侧向角测量（SSC）。

散射光强度代表细胞的大小和形态。

散射光用于荧光分析前确认细胞，但细胞也可于散射光特性分析前由荧光确认。

3. 实时数据处理和结果每一参数的光强度，以及伴随的目标颗粒数可在1～216或65536个通道中被收集，当细胞经过流动室时，其信息将被软件实时收集。

单参数直方图将显示光通道内的细胞数。

双参数点图将显示两种细胞特性间的关联程度。

4. 细胞绝对计数由于CyFlow® Space可以分析到细胞悬液中的所有细胞，并能同时精确监控样本流体积，它能完成分析过程中的体积计数，即测定任意细胞亚群浓度，并定义细胞亚群，其浓度可在后期从文件夹载入数据后再进行分析（即进行离线分析）。

基本操作——启动CyFlow® Space注意：关于鞘液，您可以使用Patec 生产的原装鞘液，也可以使用自己制备的鞘液。

制备鞘液，将蒸馏水注入玻璃瓶或三角瓶，同时用小孔径（＜0.2μm）滤网过滤，然后用真空泵（如水泵）抽去水中气体。

将瓶中液体摇匀约15分钟。

记住：您分析的颗粒越小，越要求严格清洁鞘液。

注意：要至少每周或每次使用前更换一次鞘液。

怎样在Windows®下工作，请参考手册《微软Windows介绍》或相关书籍。

1. 检查鞘液和废液瓶确认鞘液瓶已充满不超过1600ml清洁鞘液。

该鞘液已过滤，并且与鞘液瓶相连的管路内无气泡存在。

最后将鞘液瓶密封。

确认废液瓶已经排空。

2. 开机CyFlow® Space可在100～240V交流电下操作。

打开仪器左侧的主电源开关，并随后打开488nm 激光器开关，488nm激光器开关在主电源开关旁边。

其它激光器开关均由软件控制（细节请参考下一页）。

3. 调整488nm激光器的输出功率（仅限于200mw激光器）。

200mw激光器的功率调节范围在50～200mw之间，如需调整功率，请双击如左侧显示的图标（488－200）改变功率请输入：P=功率数值，然后按确认键查询当前功率值请输入：？P，然后按确认键4. 打开附属装臵打开打印机。

5. 打开计算机最后打开计算机电源开关。

大约几十秒钟后，出现Windows®桌面。

6. 启动仪器操作软件移动鼠标按钮至FloMax®, 或其他仪器控制图标。

鼠标左键双击图标。

几秒钟后，显示―Flomax®Welcome Window (FloMax®欢迎窗口)‖。

此时，CyFlow® Space开始进行初始化，并自动读取上次使用的仪器设臵。

点确定，显示空直方图。

7. 清洗将运行速度调到4。

运行1.6ml partec原厂绿色清洗液（Cleaning Slolution），再运行 1.6ml 蒸馏水，最后依次点击4次―清洗（Clean）‖按钮。

现在CyFlow® Space已完成标本运行的准备。

危险警告：生物安全性 多激光测量 注意激光器的调整必须由partec 工程师或您所 在地经销商完成。

CyFlow ® Space 根据用户的需求可以最多安装3个激光光源。

因此，您目前使用的设备可能与其它同型号设备的配臵不同。

如需了解详细情况请与partec 或您所在地的经销商联系。

为了将不同光源间的补偿减少到最小程度，从不同激光发出的光束与流动室相交与不同的位臵。

CyFlow ® Space 支持任意两个激光光束间的补偿（当使用FloMax ® 2.4或2.5版本时）或3激光之间的补偿（当使用FloMax ® 3.0版本时）。

488nm 是补偿的主激光光源，总是被默认为第1点。

附加的其它激光光源被定位于第2点和第3点。

488nm 激光光源由仪器左侧的开关单独控制，其它激光光源由软件控制： 在软件上列的菜单中选择“获取”，根据需要点击“第二激光器开关”或“第三激光器开关”，“√”表示激光器被打开，第二激光器开关控制红色激光器（如果存在），第三激光器开关控制UV 或紫色或其它激光器（如果存在）。

激光器的开关状态将被自动保存在仪器设定值文件中（请参考FloMax ®－获取和仪器控制手册）。

在标准的配臵中，所有颗粒将首先通过488nm 激光器－引导激光束，然后依次通过第二和第三激光光束（如果存在）。

因此，所有参数的获取除第一激光外均需要延迟时间，详细内容请参照参数设臵对话框（图5，第16页）。

废液是携带污染的，对人体是有害的，请每次排空废液后在废液桶内注入25ml Partec 原厂清洁液（Hypochlorite Solution ），如果废液桶内液体溅到您的皮肤上，请立即用肥皂或其它人体清洗液清洗。

开始测量注意：如何更改仪器设臵请查看FloMax® 获取和仪器控制手册。

当样本管从样本槽中被取下后，仪器的生物安全系统自动启动，目的:1.为了避免液体从样品管中滴出。

2.为了避免样本间的交叉污染。

1. 确认流式细胞仪已完成分析准备，操作软件已完成标本运行准备。

2.依照应用注解或操作规程准备标本，为了开展绝对计数，请在样本管中加入最少830ul、最多2.8ml样本，如果样本少于830ul，请用PBS 或鞘液进行稀释，并记下稀释倍数。

3. 将试管插入样品槽，以―卡答‖声确认，整个过程要迅速，在1秒内完成。

测量（采集）自动开始—FloMax软件将显示Prerun,Stabilize,Run,Count状态。

●预运行Prerun阶段，细胞被迅速运至分析位臵---流动室。

●稳定化Stabilize阶段，系统等待一定时间，以便流体能达到分析所需的较慢速度。

●运行Run阶段，分析细胞并将其归类为实时显示的直方图。

●计数Count阶段，细胞以固定体积计数。

计数阶段之后，采集自动结束。

若手动结束采集，点击―结束‖或直接从样本槽中取下样本管。

●生物安全循环系统启动●状态由“正在清洗”变为Ready如需要重复运行，不要取下样本管，点击―开始‖按钮。

4 保存结果在分析下一个样本前，请保存您的检测结果，重复本页步骤可进行下一次运行。

关闭CyFlow ® Space注意 清洗：最后必须用洁净蒸馏水清洗，以避免流动室堵塞。

或确认上次采集数据已保存。

1清洗流动室内壁及连接管路 将速度调整至15。

a) 日清洗步骤：运行1.6 ml Partec Cleaning Solution （编号04-4009）直到自动停止。