《临床生物化学与检验》实验教学大纲（本科）实验指导书：《临床物化学与检验实验指导》，钱士匀主编，
第三版，人民卫生出版社，2009年2月
编写单位：临床生物化学实验室
《临床生物化学及检验》实验教学大纲
课程编码：05290010
课程名称：临床生物化学和生物化学检验
实验指导书：临床生物化学与检验实验指导（第三版）
参考教材：临床生物化学与检验（第四版）
总学时：120学时
理论学时：60学时
实验学时：60学时
适应专业：医学检验专业
一、实验教学目的与基本要求
临床生物化学与检验是化学、生物化学与临床医学相结合的一门边缘应用学科。
临床生物化学与检验是将化学的原理和技术应用于生物体液成分的测定，为临床提供客观的诊断依据，并为监测疾病的发展和治疗效果提供可靠的指标。
临床生物化学及生物化学检验是医学检验专业的主干课程。
开设实验课的目的：
1、加深学生对临床生化检验领域的理解，使学生将理性知识与感性知识有机的结合；
2、通过教师启发式的教学，培养学生严谨的工作态度，仔细和正规的操作方法，科学和敏捷的操作思路，为今后的临床生产实习打下扎实的基础。
3、通过实验以及对实验结果地评价和分析培养学生分析问题和解决问题地能力。
4、通过实验课树立学生提高临床诊断水平，为临床服务的意识，加强学生能力的培养及创新思维和能力的训练。
本实验课的基本要求：
1、使学生掌握临床生化检验中常用的技术、检测指标数据的处理和分析方法及与临床的关系。
2、掌握常见的临床生化检验项目测定的原理、操作要求、注意事项、方法学评价及临床意义。
包括：蛋白类、糖类、无机离子、酶类、肝功能、非蛋白含氮化合物、血脂、血气及酸碱分析等。
三、考核
考核方式：选用一个实验进行实验考试，通过实验操作、实验结果与实验报告的书写等项来记分。
成绩构成：理论考试80%，本实验课占30%，包括平时成绩5%，实验报告20%，实验考试5%。
四、实验课程基本内容
二乙酰一钨法测定血清尿素
〖目的要求〗
1、掌握二乙酰一肟法测定血清尿素的操作技术与原理。
2、熟悉二乙酰一肟法测定血清尿素的临床意义。
〖主要内容〗
1、按要求加样
2、混匀沸水浴加热12分钟后取出再冷水浴5分钟后，再用分光光度计处
λ＝540nm处比色测各管A值。
3、根据公式计算结果。
赖氏法测定血清ALT
〖目的要求〗
1、掌握二乙酰一肟法测定血清尿素的操作技术与原理。
2、熟悉二乙酰一肟法测定血清尿素的临床意义。
〖主要内容〗
1、按要求加样
2、混匀后室温放置5分钟后，再用分光光度计处λ＝505nm处比色测各管A值。
3、根据标准管与酶浓度绘制标准曲线。
4、利用标准曲线找出标本对应酶活性单位。
回收试验、干扰试验
〖目的要求〗
1、掌握回收、干扰试验原理。
2、熟悉回收、干扰试验方法评价
〖主要内容〗
1、按要求制备标本，回收试验血清浓度为2.2mmmol/l，干扰试验血清浓度为6.5mmmol/l。
2、根据GOD-POD法测定各标本血糖浓度，按要求加样。
3、混匀后，37度水浴15分钟后，再用分光光度计处λ＝500nm处比色测各管
A值。
4、根据各计算公式得出回收率、干扰率、回收浓度、干扰浓度。
5、对结果进行讨论分析。
方法比较试验
〖目的要求〗
1、掌握方法比较试验原理。
2、熟悉方法比较试验方法学评价。
〖主要内容〗
1、用GOD-POD法测定两种不同浓度血清标本血糖浓度，按要求加样。
2. 混匀后，37度水浴15分钟后，再用分光光度计处λ＝500nm处比色测各管
A值。
3、再用邻甲苯胺法测定原GOD-POD法所用标本血糖浓度，按要求加样。
4、混匀后，置沸水浴中煮沸5分钟后，取出再冷水浴5分钟后，再用分光光度计处λ＝630nm处比色测各管A值。
5、集合全组同学数据，用直线回归分析法进行统计学处理，得出回归方程
y=a+bx及相关系数r。
6、根据回归方程及相关系数对被评价实验进行分析评价。
线性范围试验
〖目的要求〗
1、掌握线性范围的操作技术与原理。
2、掌握线性范围的数据处理。
〖主要内容〗
1、用GOD-POD法测定血清标本血糖浓度，按要求加样。
2、混匀后，37度水浴15分钟后，再用分光光度计处λ＝500nm处比色测各管A值。
先从低浓度往高浓度测一次，再从高到低再测一次，记下数据。
3、数据处理，描散点图。
4、方法学评价分析。
磷钨酸-镁法测定HDL-ch
〖目的要求〗
1、掌握磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇的操作技术与原理。
2、熟悉磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇的临床意义。
〖主要内容〗
1、取血清标本和沉淀剂，充分混匀置室温10分钟后3000转离心15分钟，吸取上清液进行下一步操作。
2、按要求加样，混匀37度水浴5-10分钟后，再用分光光度计处λ＝546nm处比色测各管A
3、根据公式求出标本中HDL－ch浓度。
血气分析仪的使用
〖目的要求〗
1、掌握血气分析仪的操作与原理。
2、熟悉血气分析的常用指标临床意义。
〖主要内容〗
1、讲解各指标意义
2、血气分析原理
3、练习使用血气分析仪。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
〖目的要求〗
1、胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。
2、胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的方法及临床意义。
〖主要内容〗
1、取血清标本按要求加样。
2、混匀37度水浴5-10分钟后，再用分光光度计处λ＝546nm处比色测各管A
3、根据公式求出标本中血清总胆固醇浓度。
磷酸苯二钠比色法测定法测定血清碱性磷酸酶
〖目的要求〗
1、掌握磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的操作技术与原理。
2、熟悉磷酸苯二钠比色法测定血清碱性磷酸酶的临床意义。
〖主要内容〗
1、先用标准管按要求加样，
2、立即混匀，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测各管A值。
3、根据标准管与各管对应A值绘制标准曲线。
4、血清标本中ALP的测定，按要求加样。
5、立即混匀，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测A值。
6、利用标准曲线找出标本对应酶活力单位。
还原钼蓝法测定血清磷（实验考试）
〖目的要求〗
1、掌握还原钼蓝法测血磷的操作技术与原理。
2、熟悉还原钼蓝法测血磷的临床意义。
〖主要内容〗
1、制备血清滤液：取血清标本0.2ml和三氯醋酸3.8ml，充分混匀置室温10分钟后3000转离心5分钟，吸取上清液进行下一步操作。
2、按要求加样，混匀37度水浴10分钟后，再用分光光度计处λ＝650nm处比色测各管A
3、根据公式求出标本中血清磷的浓度。
分离纯化小麦胚芽中的酸性磷酸酶
〖目的要求〗
1、掌握分离纯化小麦胚芽中酸性磷酸酶的原理。
2、熟悉分离纯化小麦胚芽中酸性磷酸酶的操作方法。
〖主要内容〗
1、小麦胚芽的准备：新鲜小麦浸泡4小时后洒水放篓中盖双层纱布，2-3天后剪麦芽备用。
2、用离速冷冻离心机，依次按要求加样离心取上清液，记录体积。
3、数据处理。
酶蛋白含量测定及比活性分析、ACP浓度-速度曲线
〖目的要求〗
1、掌握酶蛋白含量测定及比活性分析的原理。
2、酶蛋白含量测定及比活性分析的操作方法。
3、掌握ACP浓度-速度曲线、pH-ACP酶活性曲线的原理及意义
〖主要内容〗
酶蛋白含量测定：
1、先用标准管按要求加样
2、立即混匀，室温放置2分钟，再用分光光度计处λ＝595nm处比色测各管A 值。
3、根据标准管蛋白质浓度为横坐标，各管对应A值为纵座标，绘制标准曲线。
4、测定各上清液中蛋白质含量，按要求加样。
5、立即混匀，再用分光光度计处λ＝595nm处比色测A值。
6、利用标准曲线在曲线上找出各上清液所对应的蛋白质含量。
酶活性测定及比活性分析：
1、先做标准管按要求加样
2、立即混匀，室温放置10分钟，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测各管A值。
3、根据标准管酶含量为横坐标，各管对应A值为纵座标，绘制标准曲线。
4、测定各上清液中酶含量，按要求加样。
5、立即混匀，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测A值。
6、利用标准曲线在曲线上找出各上清液所对应的酶含量。
ACP浓度-速度曲线：
1、按要求加样
2、立即混匀，室温放置10分钟，再用分光光度计处λ＝510nm处比色测各管A值。
3、绘制时间进程曲线。