革兰氏染色法是1884年由丹麦病理 ChristainGram氏创立的，可将细菌区分为革 兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-） 革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和
革兰氏阴性，是由这两类细菌细 胞壁的结构和组成不同决定的
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毛霉显微结构
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根霉显微形态
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电镜下的酵母
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革兰氏染色法
一、目的要求
学习掌握革兰氏染色法 了解革兰氏染色原理 巩固显微镜操作技术及无菌操 作技术
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二、基本原理（革兰氏染色）
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染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
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染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
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染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
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附：油镜的使用
双目显微镜
Байду номын сангаас单目显微镜
仪器和其他用品：双层瓶、接种环、接种铲、接种针、 平皿、U型玻璃棒、解剖针、 解剖刀、 50%乙醇、20%甘油、高氏一号培养 基平板、马铃薯琼脂薄层平板等
四、操作步骤
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安全警示 1.加热固定时要使用载玻片夹子，以免烫伤。不要将
载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂 2.使用燃料时避免粘到衣服上 3.放线菌和霉菌制片要减少空气流动，避免吸入孢子 4.实验完毕后洗手，金黄色葡萄球菌为条件致病菌，
香柏油 二甲苯
干燥→镜检
➢注意事项：挑取菌体
涂片
干燥
涂片：取菌量不能太大
干燥：自然干燥
固定 水洗：水流染色不能直接冲在水洗涂菌处
干燥
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放线菌革兰染色
青霉的显微结构
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曲霉的显微的显微结构
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2.油镜的原理
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油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因 介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的 光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻 璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因折射而 减弱，因此能清楚地看到物象。
双层瓶
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二甲苯为有毒物质。
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细菌制片及简单染色
涂片：将玻片分成两个区域，各滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操
作的方法挑菌少许枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌于玻 片的水中，并充分混匀涂成薄膜
干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥 固定：涂面朝上，通过微火2-3次 染色：玻片泠却后加结晶紫滴于涂片上，覆盖涂面染色1分钟 水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至洗出水变无色为止
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带 正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红 等酸性染料染色
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三、实验器材与试剂
菌种：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养的12-18小时枯草芽 胞杆菌和培养24h的金黄色葡萄球菌
溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液、 吕氏碱性美蓝染液、革兰氏染色用碘液、 乳酸石炭酸棉蓝染液
二、基本原理
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染色前必须固定细菌 其目的有二：
一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上 二是增加其对染料的亲和力
常用的有加热和化学固定两种方法 固定时尽量维持细胞原有的形
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常用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱 性、中性及弱酸性溶液中常带负电荷，而碱性染料在电 离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染 色部分很容易与微生物细胞结合使其着色。常用作简单 染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。
本实验为什么采用上述生物？
四、操作步骤
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革兰氏染色法的基本步骤是： 制片—初染（结晶紫）—媒染（碘液）— 脱色（95%乙醇或丙酮）—复染 (番红) — 镜检（油镜）—混合涂片染色 经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的 细菌为革兰氏阳性菌；细菌染上复染剂的颜 色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌
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三、实验器材与试剂
菌种：大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物
金黄色葡萄球菌 16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物
溶液和试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘
液、95%乙醇、番红复染液等
仪器和其它用品：显微镜、双层瓶、接种环、载玻片夹
子、无菌生理盐水等
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细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色
革兰氏染色法
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细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色
一、实验目的
学习掌握微生物制片及简单染色的基本 技术
初步了解细菌、放线菌、酵母菌及 霉菌的形态特征和相互区别
巩固显微镜操作技术及无菌操作 技术
（注：勿冲去菌体）
干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干 镜检：显微镜下观察并记录
四、实验步骤
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1、菌落形态观察：
2、➢细注滴菌加意少简：量单水菌染落颜色色：、湿度、形状、大小、透明度 3、、➢细染颜菌➢色色涂革过、片兰程边→氏：缘干染是燥色否→规固。则定等→特染征色。（1min）→水洗→