目录1、输血前检测实验程序2、改良低离子聚凝胺法实验操作规程3、冰箱维护程序4、ABO 血型鉴定5、Rh（D）血型鉴定6、抗体筛选和鉴定试验7、临床自体输血标准操作规程8、冰冻血浆溶化操作规程输血前检测实验程序1、实验要求血清和血浆都可以用于交叉实验和抗体检测，最好是血清标本，标本使用限制在 3 天内，含有肝素等抗凝标本可以用凝血酶或硫酸鱼精蛋白处理使其凝集析出血清。

允许通过静脉输液口采集标本，但必须丢弃受残留静脉输液影响的5ml标本。

一般不允许使用溶血标本，对急性溶血性贫血和烧伤病人的溶血标本，在实验前后必须做溶血程度的比较。

标本和输血申请单上的所有资料必须填写清楚并完全符合，否则应重抽标本。

对所有用过的献血员和受血者标本必须在1-6℃冰箱至少保存7 天，所有实验都必须保证观察和记录同时进行，且记录和资料都必须至少保存 5 年。

2、血型检测要求完成病人ABO 正反定型、Rh（D），献血员血型ABO 正定型（必要时做Rh 血型），D 阴性病人必须做Du 实验确定。

3、交叉试验3.1 受血者交叉配血时所用的标本必须是输血前 3 天之内的。

3.2 配血时要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO 血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型（急诊抢救患者紧急输血时Rh（D）检查除外），正确无误时可进行交叉配血。

3.3 凡是输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩红细胞、手工分离浓缩血小板等患者，应该进行交叉配血试验。

机器单采浓缩血小板、冷沉淀、新鲜血浆应与ABO 血型同型输注。

3.4 凡遇有下列情况时必须按《全国临床检验操作规程》要求完成凝聚胺交叉试验和检测不完全抗体的交叉试验（酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法）。

除紧急输血和自身输血外，所有输入红细胞的其他制品均要求做血交叉试验。

3.5 其他试验另外必须开展的试验有抗人球蛋白试验，抗体筛选、抗体鉴定、新生儿溶血病的全套实验。

改良低离子聚凝胺法实验操作规程1、目的：减少交叉配血试验的假阳性。

2、适用范围：交叉配血、血型鉴定、抗体筛检血型血清学试验。

3、试剂来源：(台资)珠海贝索生物技术有限公司4、采集与处理：4.1 静脉采血3-4ml，并观察是否溶血、乳糜血，如有此现象应再留标本并做记录。

4.2 检查留样试管、标签、标号、姓名、血型是否齐全，如有遗漏应拒收。

4.3 将血标本试管放37℃水浴中10 分钟，离心。

5、标准操作：5.1 主（次）管加入受（供）血者血清 2 滴，加供（受）血者4%红细胞盐水悬液 1 滴。

5.2 各管加LIM0.8ml，混匀，静置 1 分钟，各管加Polybrene Reagent 1 滴，混匀，3000转/分离心15 秒，倒出上清液（残留约0.1ml），轻摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液 1 滴于管底，轻摇，凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集 1 分钟内不能被消除，即为阳性。

5、结论：阳性表示受（供）血者血清中含供（受）者红细胞血型Ag 相应的Ab（IgG、IgM），供受血者不相容，阴性表示供受血者相容。

6、注意事项：6.1 操作者须严格按照操作说明进行试验，红细胞浓度、血清滴量、反应时间、离心速度等均可影响试验结果。

6.2 若为弱凝集结果，本试剂盒按下述试验操作方法，还可进一步提高试验灵敏度。

试验操作方法如下：6.2.1 检测管中加试验血清 2 滴，4%红细胞盐水悬液 1 滴。

6.2.2 加LIM0.8ml，混匀，静置 1 分钟，各管加Polybrene 2 滴混匀，3000 转/分离心15 秒，倒出上清液（残留约01ml），轻摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液 1 滴于管底，轻摇，凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集1分钟内不能被消除，即为阳性。

6.3 检测标本应为非抗凝血，如标本中含抗凝成分的含量过高明显干扰凝集反应，可适当调加Promoter 的滴量，以中和抗凝成分的干扰。

6.4 试验温度以20-30℃为宜，若为寒冷凝集，37℃水浴5分钟，在此温下观察，凝集消失，说明冷凝集素存在。

6.5 肉眼直观判断的结果应确保与显微镜下观察结果一致，直观不能明确判断的可疑结果须镜检，镜下：阴性结果应该是单个RBC 均匀分布，有RBC 凝集状散在的即为弱阳性。

6.6 试验质量检验：取自身血清与自身红细胞用本试剂盒试验方法作自身阴性对照试验，取IgG 抗 D 血清与RhD（+）RBC 用本试剂盒试验方法作阳性对照实验，对照实验符合，试剂有效。

6.7 疑难结果以抗人球蛋白实验（AGT）作最终判断试验，试验操作参照经典AGT（在AGT中，加入本试剂盒中的LIM0.8ml 37℃孵育时间可缩短至10 分钟）。

6.8 本试剂盒适宜大多数血型抗体的检测，但对kell 血型系统抗体（主要存在白种人群）检测效果较差，由于我国黄种人群中kell 血型系统抗体阳性者罕见，因此适合在国内推广。

可补充抗人球蛋白试验，以提高对kell 血型系统抗体的检出率。

冰箱维护程序1、目的：对冰箱进行适当的维护，以确保冰箱的正常使用。

2、适用范围：本实验室使用的各种品牌、型号的冰箱。

3、负责人：科室值班人员4、操作方法4.1 储血冰箱高低温度报警装置完好；4.2 储血冰箱温度记录每天 3 次(8:00/AM,14:00/PM,20:00/PM),冰箱温度保持在2-6℃，温度计应在冰箱的上、中、下层轮流放置一天，从而测量出冰箱内温度的变化情况。

如果温度不在2-6℃之间，冰箱发出报警声，应记录可能的原因和采取的措施（将血液转移到2-6℃中的冰箱中）；4.3 所有备血存放在2-6℃储血专用冰箱中；4.4 不同血型、品种、规格的血液分别储存；4.5 不同日期的血液依次储存并登记；4.6 储血冰箱内不得存放其他物品；4.7 每天对血液进行检查。

凡标签污染被查对项目不符合规定，或已破坏血袋密闭状态，应查明原因，立即处理；4.8 尽量减少冰箱箱门的开启次数；4.9 储血冰箱每周用2%戊二醛擦拭冰箱内表面；4.10 每月一次冰箱内空气培养，由院感科采样。

细菌生长菌落＜200CFU/m3合格。

4.11 应急措施：①如遇停电，立即通知医院电工房发电；②冰箱如温度不在2-6℃之间，立即通知输血科主任采取冰箱维修，将库存血液尽快使用，在未使用完毕前另存于其它冰箱（做好冰箱的消毒及温度监测）。

ABO 血型鉴定1、测定原理根据红细胞上有或无 A 抗原或／和 B 抗原，将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型 4 种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。

所谓正定型，是用已知抗—A 和抗—B 分型血清来测定红细胞上有无相应的 A 抗原或／和 B 抗原；所谓反定型，是用已知 A 细胞和 B 细胞来测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。

2、标本种类及收集要求2.1 受检者血清；2.2 枸缘酸钠抗凝血或未稍取血，受检者血液制成 5 ％红细胞盐水悬液使用，制备方法见本节附注。

2.3 标本出现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品抗A、抗 B 血型定型试剂（单克隆抗体）：上海血液生物医药有限责任公司，产品注册号：国药准字S1*******，包装:抗A、抗B各1 支/盒，塑料瓶，规格：10ml/支，储存要求：2℃～8℃避光保存，主要成分：分泌抗人 A 型和抗人B 型血型原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。

0.9/%的生理盐水：石家庄四药有限公司。

离心机，显微镜。

4、操作步骤4.1、试管法4.1.1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)3 支，分别标明抗—A、抗—B 和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B 和抗—A 十 B 分型血清各l 滴（约50 ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液 1 滴，混和。

4.1.2 另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3 支，分别标明A、B 和O 细胞。

用滴管分别加入受检者血清l 滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l 滴，混和。

4.1.3 立即以1000r／min 离心 3 min。

4.1.4 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。

如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

4.1.5 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B 亚型、类 B 或cisAB 的发现。

4.1.6 凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3+ 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2+ 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

-表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

4.2 玻片法4.2.1 取清洁玻片 1 张(或白瓷板 1 块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B 和抗-A 十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A 十 B 分型血清l 滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液 1 滴，混和。

4.2.2 另取洁净玻片一张(或白瓷板 1 块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和O 细胞，用滴管各加受检者血清 1 滴，再分别用滴管滴加A、B 和O型试剂红细胞悬液 1 滴。

4.2.3 将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15 min，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应；再在低倍镜下观察结果。

5、结果判定ABO 血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A 十 B A 细胞 B 细胞O 细胞+ - + A - + -- + + B + - -- - - O + + -+ + + AB - - - 注：+为凝集；-为不凝集。

6、注意事项：6.1 分型血清必须为批批检试剂，且在有效期内使用；质量性能符合要求。

试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。

试剂开封后有效期为一周。

6.2 试剂红细胞以 3 个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1 次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。

或使用合格的商品诊断红细胞。

试剂红细胞有效期：自制的为15 天，商品的为试剂有效期。

试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。

试剂开封后有效期为一周。

6.3 生理盐水启用后，有效期为二周。